Verduideliking van basiese molekulêre biologie terme
1. cDNA en cccDNA: cDNA is 'n dubbelstring-DNS wat deur omgekeerde transkriptase vanaf mRNA gesintetiseer word;cccDNA is 'n plasmied dubbelstrengs geslote sirkelvormige DNA vry van die chromosoom.
2. Standaardvou-eenheid: die proteïen sekondêre struktuur-eenheid α-heliks en β-vel kan strukturele blokke vorm met spesiale meetkundige rangskikkings deur verskeie verbindende polipeptiede.Hierdie tipe vasberade vou word gewoonlik super sekondêre struktuur genoem.Byna alle tersiêre strukture kan deur hierdie voutipes beskryf word, en selfs hul gekombineerde tipes, dus word hulle ook standaardvoueenhede genoem.
3. CAP: sikliese adenosienmonofosfaat (cAMP) reseptor proteïen CRP (cAMP reseptor proteïen), die kompleks wat gevorm word na die kombinasie van cAMP en CRP word aktiveerproteïen CAP (cAMP geaktiveerde proteïen) genoem.
4. Palindromiese volgorde: Die omgekeerde komplementêre volgorde van 'n segment van 'n DNS-fragment, dikwels 'n beperkingsensiemplek.
5. micRNA: Komplementêre interfererende RNA of antisense RNA, wat komplementêr is tot die mRNA-volgorde en die translasie van mRNA kan inhibeer.
6. Ribosiem: RNA met katalitiese aktiwiteit, wat 'n outokatalitiese rol speel in die splitsingsproses van RNA.
7. Motief: Daar is 'n paar plaaslike streke met soortgelyke driedimensionele vorm en topologie in die ruimtelike struktuur van proteïenmolekules
8. Seinpeptied: 'n peptied met 15-36 aminosuurreste by die N-terminus tydens proteïensintese, wat die transmembraan van die proteïen lei.
9. Verswakker: 'n Nukleotiedvolgorde tussen 'n operateurstreek en 'n strukturele geen wat transkripsie beëindig.
10. Magic Spot: Wanneer die bakterieë groei en 'n volledige gebrek aan aminosure teëkom, sal die bakterieë 'n noodreaksie produseer om die uitdrukking van alle gene te stop.Die seine wat hierdie noodreaksie genereer, is guanosientetrafosfaat (ppGpp) en guanosienpentafosfaat (pppGpp).Die rol van PpGpp en pppGpp is nie net een of 'n paar operone nie, maar raak 'n groot aantal van hulle, so hulle word superreguleerders of towerkolle genoem.
11. Stroomop promotorelement: verwys na die DNA-volgorde wat 'n regulerende rol speel in die aktiwiteit van die promotor, soos TATA in die -10-streek, TGACA in die -35-streek, versterkers en verswakkers.
12. DNA-probe: 'n gemerkte segment van DNA met 'n bekende volgorde, wat wyd gebruik word om onbekende volgordes op te spoor en teikengene te skerm.
13. SD-volgorde: Dit is die bindingsvolgorde van ribosoom en mRNA, wat translasie reguleer.
14. Monoklonale teenliggaam: 'n Teenliggaam wat slegs teen 'n enkele antigeniese determinant optree.
15. Kosmied: Dit is 'n kunsmatig gekonstrueerde eksogene DNA-vektor wat die COS-streke aan beide kante van die fage behou en aan die plasmied gekoppel is.
16. Blou-wit kol sifting: LacZ geen (kodeer β-galaktosidase), die ensiem kan die chromogeniese substraat X-gal (5-broom-4-chloor-3-indool-β-D-galaktosied) ontbind om blou te produseer, en sodoende die stam blou maak.Wanneer die eksogene DNA ingevoeg word, kan die LacZ-geen nie uitgedruk word nie, en die stam is wit, om die rekombinante bakterieë te skerm.Dit word blou-wit sifting genoem.
17. Cis-werkende element: 'n Spesifieke volgorde van basisse in DNA wat geenuitdrukking reguleer.
18. Klenow-ensiem: Groot fragment van DNA-polimerase I, behalwe dat die 5' 3'-eksonuklease-aktiwiteit van die DNA-polimerase I-holoënsiem verwyder word
19. Geankerde PCR: gebruik om die DNA van belang te amplifiseer met 'n bekende volgorde aan die een kant.'n Poli-dG stert is aan die een kant van die onbekende volgorde gevoeg, en dan is die poli-dC en die bekende volgorde as primers vir PCR amplifikasie gebruik.
20. Fusieproteïen: Die geen van eukariotiese proteïen word met eksogene geen verbind, en die proteïen wat saamgestel is uit die vertaling van oorspronklike geenproteïen en eksogene proteïen word terselfdertyd uitgedruk.
Ander molekulêre biologie terme
1. Die fisiese kaart van DNS is die volgorde waarin die (beperking endonuklease-verteerde) fragmente van die DNS-molekule gerangskik is.
2. Die splitsing van RNase word in twee tipes (outokatalise) en (heterokatalise) verdeel.
3. Daar is drie inisiasie faktore in prokariote is (IF-1), (IF-2) en (IF-3).
4. Transmembraanproteïene benodig leiding (seinpeptiede), en die rol van proteïenchaperone is (help om die peptiedketting in die inheemse konformasie van die proteïen te vou).
5. Elemente in promotors kan oor die algemeen in twee tipes verdeel word: (kernpromotorelemente) en (stroomop promotorelemente).
6. Die navorsingsinhoud van molekulêre biologie sluit hoofsaaklik drie dele in: (strukturele molekulêre biologie), (geenuitdrukking en -regulering), en (DNS-rekombinasietegnologie).
7. Die twee sleuteleksperimente wat aantoon dat DNA die genetiese materiaal is, is (pneumokokkusinfeksie van muise) en (T2-faaginfeksie van Escherichia coli).potensiaal).
8. Daar is twee hoofverskille tussen hnRNA en mRNA: (hnRNA word gesplits in die proses van omskakeling na mRNA), (die 5'-kant van die mRNA word bygevoeg met 'n m7pGppp-dop, en daar is 'n ekstra polyadenilering aan die 3'-kant van die mRNA suur (polyA) stert).
9. Die voordele van die multi-subeenheid vorm van proteïen is (subeenheid is 'n ekonomiese metode vir DNA-benutting), (kan die impak van ewekansige foute in proteïensintese op proteïensintese verminder), (aktiwiteit kan baie doeltreffend wees en vinnig oop- en toegemaak word).
10. Die hoofinhoud van proteïenvoumeganisme eerste kernvormingsteorie sluit in (kernvorming), (strukturele verryking), (finale herrangskikking).
11. Galaktose het 'n dubbele effek op bakterieë;aan die een kant (dit kan as koolstofbron vir selgroei gebruik word);aan die ander kant (dit is ook 'n komponent van die selwand).Daarom is 'n cAMP-CRP-onafhanklike promotor S2 nodig vir die permanente sintese op die agtergrondvlak;terselfdertyd is 'n cAMP-CRP-afhanklike promotor S1 nodig om die hoëvlak sintese te reguleer.Transkripsie begin vanaf (S2) met G en vanaf (S1) sonder G.
12. Rekombinante DNA-tegnologie staan ook bekend as (geenkloning) of (molekulêre kloning).Die uiteindelike doel is (om die genetiese inligting DNA in een organisme na 'n ander organisme oor te dra).'n Tipiese DNA-rekombinasie-eksperiment sluit gewoonlik die volgende stappe in: (1) Onttrek die teikengeen (of eksogene geen) van die skenkerorganisme, en verbind dit ensimaties aan 'n ander DNA-molekule (kloningsvektor) om 'n nuwe rekombinante DNA-molekule te vorm.② Die rekombinante DNA-molekule word na die ontvangersel oorgedra en in die ontvangersel gerepliseer.Hierdie proses word transformasie genoem.③ Sift en identifiseer daardie ontvangerselle wat die rekombinante DNA geabsorbeer het.④Kweek die selle wat rekombinante DNA in groot hoeveelhede bevat om vas te stel of die vreemde-hulp-geen uitgedruk word.
13. Daar is twee tipes plasmiedreplikasie: dié wat streng deur gasheerselproteïensintese beheer word, word genoem (stywe plasmiede), en dié wat nie streng deur gasheerselproteïensintese beheer word nie, word (ontspanne plasmiede) genoem.
14. Die PKR-reaksiestelsel moet die volgende toestande hê: a.DNA-inleiders (ongeveer 20 basisse) met komplementêre volgordes aan elke kant van die twee stringe van die teikengeen wat geskei moet word.b.Ensieme met termiese stabiliteit soos: TagDNA-polimerase.c, dNTPd, DNA-volgorde van belang as sjabloon
15. Die basiese reaksieproses van PKR sluit drie stadiums in: (denaturering), (gloeiing) en (verlenging).
16. Die basiese proses van transgeniese diere sluit gewoonlik in: ①Invoering van gekloonde vreemde geen in die kern van 'n bevrugte eiersel of embrioniese stamsel;②Oorplanting van die geënte bevrugte eiersel of embrioniese stamsel in die vroulike baarmoeder;③Volledige embrioniese ontwikkeling en groei Vir die nageslag met vreemde gene;④ Gebruik hierdie diere wat vreemde proteïene kan produseer as teelvee om nuwe homosigotiese lyne te teel.
17. Hibridoma sellyne word gegenereer deur (milt B) selle te hibridiseer met (myeloom) selle, en aangesien (milt selle) hipoksantien kan benut en (been selle) seldeling funksies verskaf, kan hulle in HAT medium gekweek word.groei.
18. Met die verdieping van navorsing word die eerste generasie teenliggaampies (poliklonale teenliggaampies), die tweede generasie (monoklonale teenliggaampies) en die derde generasie (genetiese ingenieurswese teenliggaampies) genoem.
19. Tans is die genetiese manipulasie van insekvirusse hoofsaaklik gefokus op baculovirus, wat gemanifesteer word in die bekendstelling van (eksogene toksien geen);(gene wat die normale lewensiklus van insekte ontwrig);(wysiging van virusgene).
20. Die trans-werkende proteïenfaktore wat ooreenstem met die algemene elemente TATA, GC en CAAT in die soogdier-RNA-polimerase II-promotor is (TFIID), (SP-1) en (CTF/NF1), onderskeidelik.
een en twintig.Die basiese transkripsiefaktore van RNA-polimerase Ⅱ is, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, en hul bindingsvolgorde is: (D, A, B, E).Waarin die funksie van TFII-D is (bindend aan TATA-boks).
twee en twintig.Die meeste van die transkripsiefaktore wat aan DNA bind, werk in die vorm van dimere.Die funksionele domeine van transkripsiefaktore wat aan DNA bind, is gewoonlik die volgende (heliks-draai-heliks), (sinkvingermotief), (basiese-leusien) ritsmotief).
drie en twintig.Daar is drie tipes beperkings-endonuklease-splitsingsmodusse: (sny aan die 5'-kant van die simmetrie-as om 5'-taai punte te genereer), (sny aan die 3'-kant van die simmetrie-as om 3'-kleefpunte te genereer (sny by die simmetrie-as om plat segmente te genereer) ).
vier en twintig.Plasmied-DNS het drie verskillende konfigurasies: (SC-konfigurasie), (oc-konfigurasie), (L-konfigurasie).Die eerste in elektroforese is (SC-konfigurasie).
25. Eksogene geenuitdrukkingstelsels, hoofsaaklik (Escherichia coli), (Gis), (Insek) en (Soogdierseltafel).
26. Die algemeen gebruikte metodes vir transgeniese diere is: (retrovirale infeksie metode), (DNA mikro-inspuiting metode), (embrioniese stamsel metode).
Toepassing Molekulêre biologie
1. Noem die funksies van meer as 5 RNA's?
Oordrag RNA tRNA Oordrag aminosuur Ribosoom RNA rRNA Ribosoom vorm boodskapper RNA mRNA Proteïensintese sjabloon Heterogene kern RNA hnRNA Voorloper van volwasse mRNA klein kern RNA snRNA Betrokke by hnRNA splitsing Klein RNA splitsing Klein RNA RNA scRNA/7SL-RNAs sitoplasmiese RNA scRNA/7SL-RNAs sitoplasmiese RNA scRNA/7SL-RNAs sitoplasmiese RNA sRNA/7SL-RNAs proteïen sitolokale herkultuur en RNA gesinkroniseer proteïen Plasma herkultuur en RNA /micRNA Reguleer geenuitdrukking Ribosiem RNA Ensiematies aktiewe RNA
2. Wat is die hoofverskil tussen prokariotiese en eukariotiese promotors?
Prokariotiese TTGACA --- TATAAT------Inisiasieterrein-35 -10 Eukariotiese Versterker---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Inisiasieterrein-110 -70 -25
3. Wat is die hoofaspekte van kunsmatige konstruksie van natuurlike plasmiede?
Natuurlike plasmiede het dikwels defekte, dus is hulle nie geskik vir gebruik as draers vir genetiese ingenieurswese nie, en moet gemodifiseer en gekonstrueer word: a.Voeg geskikte seleksiemerkergene by, soos twee of meer, wat maklik is om vir seleksie te gebruik, gewoonlik antibiotiese gene.b.Verhoog of verminder geskikte ensiemsnyplekke om rekombinasie te fasiliteer.c.Verkort die lengte, sny onnodige fragmente af, verbeter die invoerdoeltreffendheid en verhoog die laaivermoë.d.Verander die replikoon, van styf na los, van minder kopieë na meer kopieë.e.Voeg spesiale genetiese elemente by volgens die spesiale vereistes van genetiese ingenieurswese
4. Gee 'n voorbeeld van 'n metode vir differensiële sifting van weefselspesifieke cDNA?
Twee selpopulasies word voorberei, die teikengeen word uitgedruk of hoogs uitgedruk in een van die selle, en die teikengeen word nie uitgedruk of laag uitgedruk in die ander sel nie, en dan word die teikengeen gevind deur hibridisasie en vergelyking.Byvoorbeeld, tydens die voorkoms en ontwikkeling van gewasse, sal tumorselle mRNA's met verskillende uitdrukkingsvlakke as normale selle aanbied.Daarom kan tumorverwante gene deur differensiële hibridisasie uitgesif word.Die induksiemetode kan ook gebruik word om die gene waarvan die uitdrukking geïnduseer word, uit te sif.
5. Generering en sifting van hibridoomsellyne?
Milt B-selle + myeloomselle, voeg poliëtileenglikol (PEG) by om selsamesmelting te bevorder, en die milt-B-mieloomsamesmeltingselle wat in HAT-medium (wat hipoksantien, aminopterien, T bevat) gegroei, bly voed.Die selsamesmelting bevat: milt-milt samesmeltingselle: kan nie groei nie, miltselle kan nie in vitro gekweek word nie.Been-been samesmeltingselle: kan nie hipoksantien gebruik nie, maar kan purien sintetiseer deur die tweede pad deur folaatreduktase te gebruik.Aminopterien inhibeer folaatreduktase en kan dus nie groei nie.Been-milt samesmeltingselle: kan groei in HAT, miltselle kan hipoksantien gebruik, en beenselle verskaf seldelingsfunksie.
6. Wat is die beginsel en metode om die primêre struktuur van DNA te bepaal deur die dideoxy terminale terminasie metode (Sanger metode)?
Die beginsel is om 'n nukleotiedkettingterminator-2,,3,-dideoksinukleotied te gebruik om die verlenging van DNA te beëindig.Aangesien dit nie die 3-OH benodig wat nodig is vir die vorming van 3/5/fosfodiester-bindings, sodra dit in die DNS-ketting geïnkorporeer is, kan die DNS-ketting nie verder verleng word nie.Volgens die beginsel van basisparing, wanneer DNA-polimerase dNMP benodig om aan die normaalweg verlengde DNA-ketting deel te neem, is daar twee moontlikhede, een is om aan ddNTP deel te neem, wat lei tot die beëindiging van deoksinukleotiedkettingverlenging;die ander is om aan dNTP deel te neem, sodat die DNA-ketting steeds kan voortduur totdat die volgende ddNTP geïnkorporeer is.Volgens hierdie metode kan 'n groep DNS-fragmente van verskillende lengtes wat op ddNTP eindig, verkry word.Die metode is om onderskeidelik ddAMP, ddGMP, ddCMP en ddTMP in vier groepe te verdeel.Na die reaksie kan poliakrielamiedgelelektroforese die DNS-volgorde volgens die swembande lees.
7. Wat is die positiewe reguleringseffek van aktivatorproteïen (CAP) op transkripsie?
Sikliese adenilaat (cAMP)-reseptorproteïen CRP (cAMP-reseptorproteïen), die kompleks wat deur die kombinasie van cAMP en CRP gevorm word, word CAP (cAMP-geaktiveerde proteïen) genoem.Wanneer E. coli gekweek word in 'n medium wat nie glukose bevat nie, neem die sintese van CAP toe, en CAP het die funksie om promotors soos laktose (Lac) te aktiveer.Sommige CRP-afhanklike promotors het nie die tipiese -35-streekvolgordekenmerk (TTGACA) wat algemene promotors het nie.Daarom is dit moeilik vir RNA-polimerase om daaraan te bind.Die teenwoordigheid van CAP (funksie): kan die bindingskonstante van ensiem en promotor aansienlik verbeter.Dit toon hoofsaaklik die volgende twee aspekte: ① CAP help die ensiemmolekule om korrek te oriënteer deur die konformasie van die promotor en die interaksie met die ensiem te verander, sodat dit met die -10-gebied kombineer en die rol speel om die funksie van die -35-gebied te vervang.②CAP kan ook die binding van RNA-polimerase aan ander plekke in DNA inhibeer, waardeur die waarskynlikheid van binding aan sy spesifieke promotor verhoog word.
8. Watter stappe word gewoonlik in 'n tipiese DNA-rekombinasie-eksperiment ingesluit?
a.Onttrek die teikengeen (of eksogene geen) van die skenkerorganisme, en verbind dit ensiematies aan 'n ander DNA-molekule (kloningsvektor) om 'n nuwe rekombinante DNA-molekule te vorm.b.Dra die rekombinante DNA-molekule oor na die ontvangersel en repliseer en bewaar dit in die ontvangersel.Hierdie proses word transformasie genoem.c.Sif en identifiseer daardie ontvangerselle wat die rekombinante DNA geabsorbeer het.d.Massakultuur die selle wat die rekombinante DNA bevat om vas te stel of die vreemde-hulp-geen uitgedruk word.
9. Konstruksie van geenbiblioteek Drie metodes vir sifting van rekombinante word gegee en die proses word kortliks beskryf.
Antibiotiese weerstandsifting, insersie-inaktivering van weerstand, blou-wit kol sifting of PCR sifting, differensiële sifting, DNA sonde Meeste kloning vektore dra antibiotika weerstand gene (anti-ampisillien, tetrasiklien).Wanneer die plasmied na Escherichia coli oorgedra word, sal die bakterieë weerstand verkry, en diegene sonder oordrag sal nie weerstand hê nie.Maar dit kan nie onderskei of dit herorganiseer is of nie.In 'n vektor wat twee weerstandsgene bevat, as 'n vreemde DNS-fragment in een van die gene ingevoeg word en veroorsaak dat die geen geïnaktiveer word, kan twee plaatkontroles wat verskillende middels bevat gebruik word om vir positiewe rekombinante te kyk.Die pUC-plasmied bevat byvoorbeeld die LacZ-geen (kodeer vir β-galaktosidase), wat die chromogeniese substraat X-gal (5-broom-4-chloor-3-indool-β-D-galaktosied) kan ontbind om blou te produseer en sodoende die stam blou te maak.Wanneer die vreemde DNA ingevoeg word, kan die LacZ-geen nie uitgedruk word nie, en die stam is wit, om die rekombinante bakterieë te skerm.
10. Verduidelik die basiese proses om transgeniese diere deur embrioniese stamselle te verkry?
Embrioniese stamselle (ES) is embrioniese selle tydens embrioniese ontwikkeling, wat kunsmatig gekweek en geprolifereer kan word en die funksie het om in ander tipes selle te differensieer.Kultuur van ES-selle: Die binneste selmassa van die blastosist word geïsoleer en gekweek.Wanneer ES in 'n voervrye laag gekweek word, sal dit differensieer in verskeie funksionele selle soos spierselle en N-selle.Wanneer gekweek in 'n medium wat fibroblaste bevat, sal ES die differensiasiefunksie handhaaf.ES kan geneties gemanipuleer word, en sy differensiasiefunksie kan geïntegreer word sonder om sy differensiasiefunksie te beïnvloed, wat die probleem van ewekansige integrasie oplos.Bring eksogene gene in embrioniese stamselle in, plant dan in die baarmoeder van swanger vroulike muise, ontwikkel tot kleintjies, en kruis om homosigotiese muise te verkry.
