W:Broer, die omgekeerde transkripsie is voltooi, en uiteindelik die laaste stap – fluoresserende kwantitatiewe PCR!Haai, broer, wat is intydse kwantitatiewe PCR?
M: PCR weet jy altyd, reg?
W: Jy weet, PCR is die polimerase kettingreaksie, en dit is 'n tegnologie wat DNA verhoog!
M:Dit is amper … Dit is 'n tegniese metode om die teikenvolgorde tot meer as een miljoen keer te versterk deur spesifieke primers, maar dit dui slegs op die teenwoordigheid of afwesigheid van die teikenvolgorde, en kan nie die hoeveelheid van die aanvanklike sjabloon bepaal nie.Fluoresensie kwantitatiewe PCR is 'n tegniese metode wat ontwikkel is om hierdie probleem op te los.Intydse PCR en hoeveelheid PCR (qPCR) verwys gewoonlik daarna.
W: Die verskil van gewone PCR lê in fluoressensie kwantifisering?
M: Ja, dit wil sê, in die verlengingstadium van elke PCR-siklus, word die fluoressensieseinintensiteit opgespoor, en die aanvanklike sjabloonhoeveelheid kan volgens die verandering van die seinintensiteit bereken word.
W: Dit voel so ingewikkeld!Moet ek dit self bereken?
M: Dit vereis dat jy stadig leer, dit is die beste om die beginsel te kan verstaan.Nou kan jy eers op die CT-waarde fokus, wat relatief intuïtiewe eksperimentele data is, en die grootte daarvan stem ooreen met die grootte van die aanvanklike sjabloonbedrag.Daar is ook grafieke soos versterkingskurwes en smeltkurwes.Hulle het die finale sê oor of jou eksperiment suksesvol is of nie.
W: O, broer.Dan gaan ek die qPCR-eksperiment doen!
M: Let veral op om nie sjablone by die reagensarea te voeg nie, anders sal jou ongebruikte mengsel maklik besoedel word!
W: Het dit!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Hoër doeltreffendheid, groter spesifisiteit
Hoë sensitiwiteit, goeie verenigbaarheid