• facebook
  • gekoppel
  • youtube

Lood

Lang nie-koderende RNA, lncRNA is 'n nie-koderende RNA met 'n lengte van meer as 200 nukleotiede, gewoonlik tussen 200-100000 nt.lncRNA reguleer geenuitdrukking op epigenetiese, transkripsie- en post-transkripsievlakke, en neem deel aan X-chromosoomstilte, genoom-afdruk en chromatienmodifikasie, transkripsie-aktivering, transkripsie-interferensie, kernvervoer, selsiklusregulering, seldifferensiasieregulering, en dosiskompensasie-effek wat baie noue kompensasie-effek voorkom, ioon van menslike siektes, en is tans een van die brandpunte op die gebied van biogeneeskunde.

01  Tipes en kenmerke van LncRNA

nuus723 (1)

lncRNA word in baie tipes verdeel volgens die verskillende bronne van sy vorming, soos in die figuur hierbo getoon.Het die volgende eienskappe:

1. lncRNA's is gewoonlik langer, met dinamiese uitdrukking en verskillende splitsingsmetodes tydens differensiasie
2. In vergelyking met koderende gene, het lncRNA gewoonlik 'n laer uitdrukkingsvlak
3. Die meeste lncRNA's het duidelike tydelike en ruimtelike uitdrukking spesifisiteit in die proses van weefseldifferensiasie en -ontwikkeling
4. Daar is kenmerkende uitdrukkings in gewasse en ander siektes
5. Die subsellulêre liggings van lncRNA is uiteenlopend
6. Die volgorde is laag in bewaring, maar die funksie het 'n sekere mate van bewaring, ens.

02 Gereelde vrae oor LncRNA-omgekeerde transkripsie

As gevolg van die lae inhoud van lncRNA in selle, lang lengte en hoëvlakstruktuur, het sulke RNA dikwels komplekse strukture soos stamlusse of haarnaaldjies, en RT-qPCR is geneig tot probleme van onsuksesvolle omgekeerde transkripsie of lae doeltreffendheid.

03 LncRNA omgekeerde transkripsie oplossing

nuus723 (2)

In die sentrale reël word die proses van RNA-virusse wat hul eie omgekeerde transkripsie gebruik om DNA te sintetiseer deur RNA as 'n sjabloon te gebruik, omgekeerde transkripsie genoem.Die proses om RNA-virus omgekeerde transkriptase te gebruik om cDNA-sjabloon in vitro te sintetiseer, word omgekeerde transkripsie genoem.Die hoofelemente ingesluit in die omgekeerde transkripsiestelsel: RNA-sjabloon, omgekeerde transkripsie, primers en ander komponente.

1.RNA-sjabloon

Die invloed van RNA-sjabloon op omgekeerde transkripsie word weerspieël in die struktuur, suiwerheid en integriteit daarvan.Hoe hoër die suiwerheid en integriteit van die onttrekte RNA, hoe hoër die doeltreffendheid van omgekeerde transkripsie en hoe meer akkuraat is die daaropvolgende kwantitatiewe resultate.Die RNA wat deur algemeen gebruikte RNA-ekstraksie-reagense gesuiwer word, bevat dikwels oorblyfsels van alkohol en guanidiensoute, wat 'n sterk inhiberende effek op die meeste tru-transkripsie het.

2.Omgekeerde transkripsie

Omgekeerde transkripsie het 'n sleutelinvloed in die hele omgekeerde transkripsiestelsel.Die geskikte temperatuur vir die omgekeerde transkripsie wat in die meeste laboratoriums gebruik word, is oor die algemeen 42°C.Trouens, die opening van die hoëvlak-RNA-struktuur vereis 'n hoër temperatuur, en die vereistes vir die omgekeerde transkripsie is hoër.

3.Onderlaag

Omgekeerde transkripsie-inleiders sluit geen-spesifieke primers, ewekansige primers en Oligo dT-primers in.Die meeste lncRNA's bevat nie polyA-sterte nie, en dit is belangrik om die ewekansige primers behoorlik met Oligo dT te pas.

4.Ander komponente

In die lig van die feit dat RNA besonder maklik is om af te breek, kan die bekendstelling van komponente in die omgekeerde transkripsiestelsel geminimaliseer word, wat effektief die toetrede van RNase kan voorkom en die gladde vordering van omgekeerde transkripsie kan verseker.

Foregeneverkry van RNA-sjabloon, omgekeerde transkripsie na qPCR

Begelei u lncRNA-opsporing omvattend

nuus723 (3)

Diere Totale RNA IvertroostingKit (met gDNA verwydering kolom)

nuus723 (4)

Seltotaal RNA IvertroostingKit (met gDNA verwydering kolom)

nuus723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (Met gDNase) (Super Premix vir eerste-string cDNA sintese vanaf lncRNA)

nuus723 (6)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Groen I

Avoordele ofRNA onttrekking:

Die kit gebruik die derde generasie RNA-ekstraksietegnologie, dit hoef nie DNase te gebruik nie.

11 minute vanaf 96, 24, 12 en 6-put plaat gekweekte selle, hoë-doeltreffendheid onttrekking van gDNA-vrye, hoë-suiwer, hoë-gehalte totale sel RNA.

Voordele van lncRNA omgekeerde transkripsie:

’n Omgekeerde transkripsiestelsel wat spesiaal vir LncRNA ontwikkel is om genomiese DNA-kontaminasie vinnig te verwyder.

Die omgekeerde transkripsiestelsel het hoë termiese stabiliteit en het steeds goeie omgekeerde transkripsieprestasie by 50°C.

Sjablone met hoë GC-inhoud en komplekse sekondêre struktuur kan met hoë doeltreffendheid omgekeer word.

Voordeleof qPCR:

Warm begin Foregene Taq Polymerase het hoër amplifikasie doeltreffendheid, hoër amplifikasie sensitiwiteit en hoër amplifikasie spesifisiteit

Die geoptimaliseerde Real PCR Easy Mix maak dat SYBR Green I 'n hoër opsporingsensitiwiteit het, en sy fluoressensie-intensiteit is 3-5 keer dié van soortgelyke produkte, wat aan die behoeftes van verskillende tipes fluoressensie-kwantitatiewe eksperimente kan voldoen.


Postyd: 23 Julie 2021