Plant Total RNA Isolation Kit Total RNA Suiwering Kit vir Plant Lae in Polisakkariede en Polifenole
Spesifikasies
50 voorbereidings, 200 voorbereidings
Die stel gebruik die spinkolom en formule wat deur Foregene ontwikkel is, wat hoë-suiwerheid en hoë kwaliteit totale RNA doeltreffend uit verskeie plantweefsels met 'n lae polisakkaried- en polifenole-inhoud kan onttrek.Vir plantmonsters met hoë polisakkariede of polifenole inhoud, word dit aanbeveel om Plant Total RNA Isolation Plus Kit te gebruik om beter RNA ekstraksie resultate te kry.Die stel verskaf die DNA-skoonmaakkolom wat genomiese DNA maklik uit die supernatant en weefsellisaat kan verwyder.RNA-alleen kolom kan RNA effektief bind.Die kit kan 'n groot aantal monsters op dieselfde tyd verwerk.
Die hele stelsel bevat nie RNase nie, dus sal die gesuiwerde RNA nie afgebreek word nie.Buffer PRW1 en Buffer PRW2 kan verseker dat die RNA wat verkry word nie deur proteïen, DNA, ione en organiese verbindings besmet is nie.
Kit komponente
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-vry ddH2O, DNA-skoonmaakkolom |
| RNA-Slegs Kolom |
| Instruksies |
Kenmerke en voordele
■ Werk by kamertemperatuur (15-25 ℃) deur die hele proses, sonder ysbad en lae-temperatuur sentrifugering.
■ Volledige stel RNase-vry, hoef nie bekommerd te wees oor RNA-afbraak nie.
■ DNS-skoonmaakkolom bind spesifiek aan DNS, sodat die stel genomiese DNS-kontaminasie kan verwyder sonder om DNase by te voeg.
■ Hoë RNA-opbrengs: RNA-slegs Kolom en unieke formule kan RNA doeltreffend suiwer.
■ Vinnige spoed: maklik om te gebruik en kan binne 30 minute voltooi word.
■ Veiligheid: geen organiese reagens word benodig nie.
■ Hoë gehalte: Die gesuiwerde RNA-fragmente is van hoë suiwerheid, vry van proteïene en ander onsuiwerhede, en kan aan verskeie stroomaf eksperimentele toepassings voldoen.
Kit aansoek
Dit is geskik vir die ekstraksie en suiwering van totale RNA uit vars of bevrore plantweefselmonsters (veral vars plantblaarweefsel) met 'n lae polisakkaried- en polifenoleinhoud.
Werk vloei
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus het 50mg vars blare van polisakkariede en polifenole verwerk, en 5% gesuiwerde RNA is deur elektroforese getoets.
1: Piesang
2: Ginkgo
3: Katoen
4: Granaatjie
Berging en raklewe
Die stel kan vir 12 maande by kamertemperatuur (15–25 ℃) in droë omgewing gestoor word, en 2–8 ℃ vir langer tyd (24 maande).
Buffer PSL1 kan vir 1 maand by 4 ℃ gestoor word nadat 2-hidroksi-1-etaantiol (opsioneel) bygevoeg is.
Probleemontledingsgids
Die volgende ontleding van die probleme wat jy kan teëkom inPlant totaalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Die spinkolom is verstop
Blokkering van die spinkolom sal veroorsaak dat die RNA-opbrengs verminder word of selfs nie gesuiwer kan word om RNA te verkry nie, en die kwaliteit van die verkregen RNA sal laag wees.
Algemene oorsaak-analise:
1. Die monster is nie heeltemal gebreek nie.
Onvolledige monsterfragmentasie kan die DNA-skoonmaakkolom blokkeer, wat ook RNA-opbrengs en kwaliteit kan beïnvloed.Ons beveel aan dat wanneer monsterfragmentasie uitgevoer word, vinnig genoegsame hoeveelhede vloeibare stikstof maal om die weefsels soos selwande en selmembrane van die monsters soveel as moontlik op te breek.Vir plantmonsters van polifenolpolisakkariede, beveel ons aan dat jy Plant Total RNA Isolation Kit Plus gebruik.
2.Aspireer die DNA-skoonmaakkolom geïsoleerde supernatant, aspireer die moontlike selafvalkorrel.
Geaspireerde selafvalkorrel kan die slegs-RNA-kolom verstop tydens RNA-adsorpsieprosedures (sien stap 5 van prosedure, stap 6 van die polisakkaried polifenolprosedure).Ons beveel aan dat versigtigheid gedra moet word wanneer hierdie supernatant geaspireer word om te verhoed dat selafval geaspireer word.
3. Die aanvanklike hoeveelheid monster is te groot.
Oormatige monstergebruik sal lei tot onvolledige monsterfragmentasie of onvolledige lysis van selle deur Buffer PRL1 of Buffer PSL1, wat lei tot 'n verstopte suiweringskolom vir suiweringsoperasies.Plant Total RNA Isolation Kit het 'n aanvanklike maksimum van 50 mg per enkele suiwering van 'n geopereerde monster.Vir plantmonsters van polifenol-polisakkariede, beveel ons aan dat jy die Plant Total RNA Isolation Kit Plus probeer.
4. Die temperatuur van die sentrifuge is te laag.
Hele RNA isolasie en suiwering behalwe vir vloeibare stikstof ontwrigting van monsterweefsel, word alle stappe by kamertemperatuur (20-25 °C) uitgevoer.Sommige lae-temperatuur sentrifuges het temperature onder 20 °C, wat blokkasies in die DNA-skoonmaakkolom en/of RNA-alleenkolom kan veroorsaak.Indien dit gebeur, stel die sentrifuge-temperatuur op 20-25 °C en verhit die lisismengsel en/of die byvoeging van etanol-skeidingsupernatant vooraf tot 37 °C.
Geen RNA onttrek of RNA-opbrengs is laag nie
Daar is gewoonlik baie faktore wat die herwinningsdoeltreffendheid beïnvloed, soos: monster RNA-inhoud, werkingsmetode, die elueringsvolume, ens.
Ontleding van algemene oorsake soos hieronder:
1. 'n Ysbad of lae temperatuur (4°C) sentrifugering is tydens die operasie uitgevoer.
Voorstel: Werk by kamertemperatuur (15-25°C) in die hele proses, moenie ysbad en lae temperatuur sentrifugering doen nie.
2.Die RNA is afgebreek as gevolg van onbehoorlike bewaring van die monster of langtermynbewaring van die monster.
Aanbeveling: Vars versamelde monsters moet vinnig in vloeibare stikstof gevries word, en dan vir 'n lang tyd by -80°C gestoor word, vermy herhaalde vries en ontdooiing van monsters;of week die monsters dadelik in RNA stabilisator RNAlater oplossing (diermonsters).
3.Onvoldoende monsterfragmentasie en lisis lei tot blokkasie van die suiweringskolom.
Voorstel: Wanneer die weefsel gemaal word, maak asseblief seker dat die weefsel voldoende gemaal is, en dra dit vinnig oor na die voorafbereide Buffer PSL1 (bevestig dat die korrekte proporsie β-ME bygevoeg is, sien stap 1 van die prosedure).
4.Die eluent is verkeerd bygevoeg.
Voorstel: Maak seker dat RNase-Free ddH2O word in die middel van die suiweringskolommembraan gedrup.
5.Die korrekte volume absolute etanol is nie by Buffer PSL2 of Buffer PRW2 gevoeg nie.
Voorstel: Volg asseblief die instruksies, voeg die korrekte volume absolute etanol by Buffer PSL2 en Buffer PRW2 en meng goed voor die stel gebruik word.
6. Die hoeveelheid weefselmonster is onvanpas.
Voorstel: Gebruik 50 mg weefsel per 500 μl Buffer PSL1.Die gebruik van te veel weefsel sal die hoeveelheid RNA wat onttrek word verminder en die suiwerheid van die resulterende RNA sal ook verminder word.Ons beveel sterk aan dat die aanvanklike monsterdosis nie 50 mg per RNA-ekstraksie-operasie moet oorskry nie.
7. Onvanpaste elueringsvolume of onvolledige eluering.
Voorstel: Die eluentvolume van die suiweringskolom is 50-200 μl;indien die elueringseffek nie bevredigend is nie, word dit aanbeveel om die tyd by kamertemperatuur te verleng nadat voorverhitte RNase-vrye ddH bygevoeg is2O, soos 5-10min.
8. Die suiweringskolom het etanolresidu nadat dit met Buffer PRW2 gewas is.
Voorstel: As die leë buis vir 1 min sentrifugeer word en daar is nog etanol oor na was in Buffer PRW2, kan jy die tyd van die leë buis sentrifugering na 2 min verhoog, of die suiweringskolom vir 5 min by kamertemperatuur plaas om die oorblywende etanol heeltemal te verwyder.
9.Die stel is verkeerd gebruik.
Voorstel: Vir plantmonsters van polifenoliese polisakkariede kan die gebruik van algemene stelle soos Plant Total RNA Isolation Kit dalk nie ideale RNA monsters verkry nie.Ons beveel aan dat jy Plant Total RNA IsolationKit Plus gebruik, wat spesiaal ontwerp is vir polifenoliese polisakkariedplantmonsters.’n Stel spesiaal ontwikkel vir die onttrekking van RNA uit polifenol- en polisakkariedplantmonsters.
OD260/OD280 waarde is laag
RNA-eluering met ddH2O en gebruik vir spektrofotometerlesings lei tot lae OD260/OD280 waardes.Ons beveel aan om 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (eerder as RNase-vrye ddH) te gebruik2O om RNA te elueer) om relatief korrekte OD260/OD280-waardes te verkry, sien “RNA-konsentrasie- en suiweringstoetse” op bladsy 19.
Die gesuiwerde RNA word afgebreek
Die kwaliteit van gesuiwerde RNA hou verband met faktore soos monsterpreservering, RNase-kontaminasie en manipulasie.
Ontleding van algemene oorsake:
1. Weefselmonsters is nie betyds na versameling gestoor nie.
Aanbeveling: Indien die weefselmonsters nie betyds na versameling gebruik word nie, stoor dit asseblief onmiddellik in vloeibare stikstof by lae temperatuur of dra dit oor na -80°C vir langtermynberging na vinnige vriesing in vloeibare stikstof, of dompel die monsters dadelik in RNA stabiliseerder RNAlater oplossing (diermonsters).Vir RNA-ekstraksie, probeer om vars versamelde weefselmonsters te gebruik.
2. Herhaalde bevriesing en ontdooiing van weefselmonsters.
Voorstel: Wanneer weefselmonsters gestoor word, is dit die beste om dit in klein stukkies te sny vir preservering, en 'n deel daarvan uit te haal wanneer dit gebruik word om die afbraak van RNA wat veroorsaak word deur herhaalde vries en ontdooiing van die monsters te vermy.
3.RNase word in die operasiekamer ingebring of weggooibare handskoene, maskers, ens.
Voorstel: RNA-ekstraksie-eksperimente word die beste uitgevoer in afsonderlike RNA-operasies, en die laboratoriumtafel moet voor die eksperiment skoongemaak word, en weggooibare handskoene en maskers moet tydens die eksperiment gedra word om RNA-afbraak wat veroorsaak word deur die bekendstelling van RNase tot die grootste mate te vermy.
4.Die reagens is tydens gebruik deur RNase besmet.
Voorstel: Vervang met 'n nuwe reeks plant totale RNA ekstraksiestelle vir verwante eksperimente.
5. Die sentrifugebuisies en pipetpunte wat vir RNA-manipulasie gebruik word, is met RNase besmet.
Voorstel: Maak seker dat die sentrifugeerbuise, pipetpunte, pipette, ens. wat in RNA-ekstraksie gebruik word, almal RNase-vry is.
Instruksiehandleidings:
