Skrywers: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Eenheid: Jiaozhou Hospitaal, Dongfang Hospitaal Geaffilieer aan Tongji Universiteit

Tans is die hoofmonstertipe vir respiratoriese patogeen-nukleïensuuropsporing keeldepper.Daar is baie soorte algemeen gebruikte monsterpreserveringsoplossings, wat almal verkoel of gevries moet word vir vervoer en berging;Dit is moeilik om die hele proses van lae temperatuur tydens die versameling en vervoerproses te beheer, en dit is moeilik om die kwaliteitsbeheer te verseker voor monstertoetsing^[1-2].

RNase (RNase) is 'n endonuklease wat RNA hidroliseer, wat hoofsaaklik fosfodiesterbindings tussen nukleotiede verbreek.Die RNase-molekule is baie stabiel, daar is disulfiedbindings in die struktuur, en sy aktiwiteit vereis nie die teenwoordigheid van tweewaardige katione nie, dus word RNase nie maklik gedenatureer nie, en dit is maklik om te hernatureer selfs na hoë temperatuur of die gebruik van denaturante.RNases word in endogene en eksogene verdeel.Die endogene RNases kan op dieselfde tyd vrygestel word wanneer selle gebars word.Daarom is die uitskakeling van die rol van endogene RNases 'n baie kritieke stap in die RNA-ekstraksieproses.Eksogene RNases is wydverspreid.RNases bestaan ​​in die lug, menslike vel, hare en speeksel, wat belangrike redes is vir die maklike afbreek van RNA^[3].

Datanavraag

CANS-CL02-A009 “Toepassing van Mediese Laboratorium Kwaliteit en Bevoegdheid Akkreditasie Riglyne op die gebied van Molekulêre Diagnose” in die tegniese vereistes stel voor dat toepaslike waterkwaliteitstandaarde volgens die aansoek geformuleer moet word;Weggooibare lugdigte houers:

RNase/Klassifikasie

(1) RNase A

Ribonuklease A (RNase A), afgelei van beespankreas, is 'n endoribonuklease wat spesifiek die 3'-punt van pirimidienreste op RNA kan aanval, wat sitosien of urasil wat deur aangrensende nukleotiede gevorm word, sny.Fosfodiesterbinding, die finale produk van die reaksie is 'n 3'-pirimidien-nukleotied en 'n oligonukleotied met 'n 3'-pirimidien-nukleotied aan die einde.

(2) RNase T1

Ribonuklease T1 (RNase T1) is afkomstig van Aspergillus orjzae, dit werk spesifiek op die 3'-terminale fosfaat van guanien, en die splitsingsplek is tussen die 3'-fosfaat van guanien en die 5'-hidroksiel van aangrensende nukleotiede.Die finale produk van die reaksie is 3'guanielsuur en oligonukleotiedfragmente met 3'guanielsuur aan die einde.

(3) RNase H

Ribonuklease H (RNase H) is vir die eerste keer van kalf-timusweefsel ontdek, en sy koderende geen is in Escherichia coli gekloneer.Dit kan spesifiek DNA afbreek: RNA-stringe in RNA-hibriedduplekse, wat lei tot oligonukleotiede en mononukleotiede met 3'-OH en 5'-monofosfaatpunte, dit kan nie enkel- of dubbelstring DNA of RNA afbreek nie.

RNase

Funksie en gebruik

Ribonuklease kan die afbraak van ribonukleïensuur (RNA) kataliseer en kan kunsmatig gesintetiseer word.Medisinale salf word plaaslik gebruik om trauma en gewrigspyn te behandel.Volgens berigte kan ribonuklease gasheerselmetabolisme verander, virussintese inhibeer, die verspreiding van griepvirus in vitro inhibeer en die vorming van vaccinia- en herpesvirus in hoenderembrio's inhibeer.Kliniese gebruik van ribonuklease daaglikse binnespierse inspuiting van 180 mg, voordelig vir die behandeling van epidemiese enkefalitis, ribonuklease kan die afbraak van ribonukleïensuur (RNA) kataliseer, en kan nou kunsmatig gesintetiseer word.Medisinale salf word plaaslik gebruik om trauma en gewrigspyn te behandel.Volgens berigte kan ribonuklease gasheerselmetabolisme verander, virussintese inhibeer, die verspreiding van griepvirus in vitro inhibeer en die vorming van vaccinia- en herpesvirus in hoenderembrio's inhibeer.Kliniese gebruik van ribonuklease daaglikse binnespierse inspuiting van 180 mg is voordelig vir die behandeling van epidemiese enkefalitis.

RNase

Inhibeerder Definisie

Definisie van RNase inhibeerder eenheid: Die hoeveelheid ensiem wat benodig word om 50% van die aktiwiteit van 5ng RNase A te inhibeer is een eenheid.

Hoe RNase-inhibeerders werk

Guanidien isotiosianaat:

Guanidien isothiocyanate is 'n organiese verbinding met die molekulêre formule C2H6N4S.Word hoofsaaklik gebruik in biologiese medisyne, chemiese reagense, ens. Guanidien-isotiosianaat is 'n proteïenlysmiddel, en dit word dikwels as die hoofkomponent van lise-oplossing in molekulêre diagnostiese reagense gebruik.Dit kan weefsel liseer, selstruktuur vernietig en nukleïensuur van nukleoproteïen dissosieer, en het sterk denaturasie na RNase.Dit is tans die mees effektiewe RNase-inhibeerder.

TRIzol is 'n nuwe totale RNA-ekstraksie-reagens wat totale RNA direk uit selle of weefsel kan onttrek.Dit bevat stowwe soos fenol en guanidien isotiosianaat, wat selle vinnig kan ontwrig en nukleases wat deur selle vrygestel word, inhibeer.

(Die guanidien isothiocyanate is egter gevaarlik vir laboratoriumnavorsers se gesondheid.)

RNAsin:

Suurglikoproteïen wat uit rotlewer of menslike blastoderm onttrek word.Rnasin is 'n nie-mededingende inhibeerder van RNase, wat aan verskeie RNases kan bind om hulle te inaktiveer.

(Meer besonderhede: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhoë temperatuur:

Hoë temperatuur is ook 'n algemene manier van proteïendenaturering.

Dietielpirokarbonaat (DEPC):

DEPC is 'n sterk maar onvolledige RNase-inhibeerder, wat RNase-aktiwiteit kan inhibeer deur te kombineer met die aminosuur-imidasoolring van die RNase-aktiewe groep om proteïene te denatureer.

Vanadyl ribonukleosied kompleks:

'n Kompleks wat gevorm word deur vanadiumoksiedione en nukleosiede, wat aan RNase bind in die vorm van oorgangsstowwe, wat die aktiwiteit van RNase byna heeltemal kan inhibeer

ander:

SDS, ureum, diatomeeënaarde, ens. het ook 'n sekere inhiberende effek op RNase.

Kundige resensies

Li Yujie Hooftegnikus

Direkteur van Laboratoriumafdeling, Jiaozhou Hospitaal, Dongfang Hospitaal Geaffilieer aan Tongji Universiteit

Om die biodegradasie van eksogene RNase te voorkom, moet maskers, handskoene en hoede gereeld tydens die RNA-ekstraksieproses gedra en vervang word.Alle glasware moet vir meer as 2 uur in 'n droogoond by 200°C gebak word.Materiaal wat vir bak gebruik word, soos plastiek, moet met DEPC-water behandel word, en dan met gedistilleerde water gewas word.Die reagense of toestelle wat vir ekstraksie, preservering en identifikasie van RNA gebruik word, moet aan RNA toegewy word, en 'n onafhanklike RNA-operasiearea moet ingerig word.

verwysings:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakterieë en virusse in die nasofarinks onmiddellik voor die aanvang van akute laer respiratoriese infeksies by inheemse Australiese kinders [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Hospitaalinfeksiebeheertak van Chinese voorkomende medisynevereniging.Riglyne vir die versameling en inspeksie van kliniese mikrobiese monsters [J].Chinese Tydskrif vir Hospitaalinfeksie, 2018(20):3192-3200.

[3] "Kliniese Toets Tien Duisend Hoekom Molekulêre Biologie Toetsvolume"