Die volgende ontleding van moontlike probleme inBuccaaldepper/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Die suiweringskolom is verstop

In hierdie kit, in die genomiese DNA-ekstraksie-operasie, word die suiweringskolom direk op die monster ensiematiese lisismengsel geadsorbeer sonder sentrifugeringstap, en die suiweringskolom kan geblokkeer word as gevolg van onvolledige ensiemisering en hoë viskositeit van die monster.

Die volgende moontlike oorsake is soos volg:

1. Onvolledige ensiematiese vertering van weefselmonsters.

Aanbeveling: Die monsterverwerkingstyd van Foregene Protease kan toepaslik verleng word of die supernatant kan geneem word na sentrifugering teen 12,000 rpm (~13,400× g) vir 5 min.

2. Oormatige gebruik van weefselmonsters of groot weefsels.

Aanbeveling: Dit is die beste om nie 1 te oorskry nieBuccaal depper in die monster;indien die monster te groot is, verhoog die dosis Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 dienooreenkomstig.

3. Die monster viskositeit is te hoog.

Aanbeveling: Monsters kan toepaslik verdun word met 10 mM Tris-HCl voor genomiese DNA ekstraksie.

4. Fragmente van die bloedkaart is gesuig.

Aanbeveling: Die verbygaande sentrifugering tyd van stap 6 van bloedvlek (FTA Kaart) genomiese ekstraksie kan toepaslik verleng word.

Lae opbrengs of geen DNA

Daar is dikwels 'n verskeidenheid faktore wat genomiese DNA-opbrengs beïnvloed, insluitend monsteroorsprong, monsterbergingstoestande, monstervoorbereiding, manipulasie, ens.

Genomiese DNA kan nie tydens ekstraksie verkry word nie

Die moontlike oorsake is soos volg:

1. Onbehoorlike bewaring van monsters of berging vir te lank lei tot genomiese DNA-afbraak.

Aanbeveling: Monddeppers moet verkieslik vars gemonster word, en dit is nie raadsaam om bewaarde deppers vir genomiese DNA-ekstraksie-operasies te gebruik nie;bloedvlekmonsters moet verseker dat die kwaliteit gekwalifiseer is en die bergingstyd moet nie te lank wees nie.

2. Te min weefselgebruik kan lei tot geen ekstraksie van die ooreenstemmende genomiese DNA nie.

Aanbeveling: Volg diebuccal deppermonsternemingsinstruksies in die operasiegids, en vee soveel keer as moontlik af sodat genoeg selle aan die monddepper geheg kan word vir genomiese DNA-ekstraksie;vir die onttrekking van bloedvlekmonsters, kan die bloedvleksnyarea gepas vergroot word.

3. Foregene Protease word onbehoorlik bewaar, wat lei tot 'n afname in sy aktiwiteit of inaktivering.

Aanbeveling: Bevestig die bergingstoestande vandie Foregene Protease of vervang dit met 'n nuwe Foregene Protease vir ensiematiese reaksie.

4. Onbehoorlike bewaring van die kit of bergingstyd is te lank, wat lei tot die mislukking van sommige komponente in die kit.

Aanbeveling: Koop 'n nuweBuccaal depper DNAisolasie kit vir verwante prosedures.

5. Buffer WB voeg nie absolute etanol by nie.

Aanbeveling: Bevestig dat buffer WB die korrekte volume absolute etanol byvoeg.

6. Die eluent word nie korrek by die silikoonfilm gevoeg nie.

Aanbeveling: Voeg 65 by°Cvoorverwarmde eluent val na die middel van die silikoonmembraan en laat 5 minute by kamertemperatuur om die elueringsdoeltreffendheid te verhoog.

Low-opbrengs genomiese DNA geïsoleer

Die volgende moontlike oorsake is soos volg:

1. Onbehoorlike bewaring van monsters of berging vir te lank lei tot genomiese DNA-afbraak.

Aanbeveling: Monddeppers word verkieslik vars gemonster, en bewaarde deppers moet nie vir genomiese DNA-ekstraksie gebruik word nie.

2. As die hoeveelheid weefselmonster te klein is, sal die onttrekte genomiese DNA-inhoud minder wees.

Aanbeveling: Volg die mondelinge depper-monsternemingsinstruksies in die bedryfsgids en vee soveel keer as moontlik af sodat genoeg selle aan die monddepper geheg kan word vir genomiese DNA-ekstraksie.

3. Foregene Protease word onbehoorlik bewaar, wat lei tot 'n afname in sy aktiwiteit of inaktivering.

Aanbeveling: Bevestig die bergingstoestande vanthe Foregene Protease of vervang dit met 'n nuwe Forgene Protease vir ensiematiese reaksie.

4. Eluent probleme.

Aanbeveling: Gebruik Buffer EB vir eluering;as jy ddH gebruik₂O of ander eluente, bevestig dat die pH van die eluaat tussen 7.0-8.5 is.

5. Die eluaat word nie korrek druppelsgewys bygevoeg nie.

Aanbeveling: Voeg eluentdruppels by die middel van die silikoonmembraan en laat staan ​​by kamertemperatuur vir 5 min om elueringsdoeltreffendheid te verhoog.

6. Die elueringsvloeistof versamel te min.

Aanbeveling: Gebruik eluent vir genomiese DNA elutie soos vereis in die instruksies, ten minstenie minder as 15μl.

Low reinheid of genomiese DNAgeïsoleer

Lae genomiese DNA-suiwerheid kan lei tot mislukking of onbevredigende resultate van stroomaf eksperimente, soos: ensieme kan nie oopgesny word nie, PKR kan nie die geenfragment van belang kry nie, ens.

Die moontlike oorsake is soos volg:

1. Heteroproteïenbesoedeling, RNA-besoedeling.

Ontleding: Die suiweringskolom is nie met Buffer PW gewas nie;die Buffer PW wassuiweringskolom is nie met die korrekte sentrifugale spoed gewas nie.

Aanbeveling: Maak seker dat daar geen neerslag in die supernatant is voordat etanol bygevoeg word nie;maak seker dat u die suiweringskolom volgens die instruksies was, en hierdie stap kan nie weggelaat word nie.

2. Onreinheid ioonbesoedeling.

Ontleding: Buffer WB wassuiweringskolom is weggelaat of slegs een keer gewas, wat gelei het tot oorblywende ioniese kontaminasie.

Aanbeveling: Maak seker dat Buffer WB 2 keer gewas word soos aangedui om oorblywende ione soveel as moontlik te verwyder.

3. RNA ensiem kontaminasie.

Ontleding: Buitelandse RNases is by buffer gevoeg;Buffer PW was werking was verkeerd, wat gelei het tot RNase residue, wat stroomaf RNA eksperimentele bewerkings beïnvloed, soos in vitro transkripsie.

Aanbeveling: Foregene reeks nukleïensuurisolasiestelle kan RNA verwyder sonder bykomende toevoeging van RNase,dus buccale depper/FTA-kaart DNA-isolasiestelnodig't voeg RNase by;maak seker dat u die instruksies vir Buffer PW-wassuiweringskolom volg, en hierdie stap kan nie weggelaat word nie.

4. Etanolresidu.

Ontleding: Buffer WB het nie leë buis sentrifugering uitgevoer nadat die suiweringskolom gewas is nie.

Aanbeveling: Voer die korrekte leë buis sentrifugering bewerking uit volgens die instruksies.

5. Ander onreinheid besoedeling.

Ontleding: Gestoorde monsters of spesiale monsters word nie voorbehandel nie.

Aanbeveling: Behandel die monster deeglik soos voorgeskryf.