Vestig PCR-eksperiment-SOP om die gedrag van eksperimentpersoneel te standaardiseer.
Die eksperimenteerder hou streng by die bedryfsprosedures en minimaliseer die PCR-besoedeling wat deur menslike faktore veroorsaak kan word of voorkom dat besoedeling voorkom.Daarbenewens moet die eksperimenteerder oor die ooreenstemmende professionele kennis en vaardighede beskik, insluitend vaardigheid in die bedryf van verwante toerusting, die opheldering van die hele werkproses, die bemeestering van die behandelingsmetodes van kontaminasie en laboratoriumgehaltebeheermetodes, en om die toetsresultate korrek te interpreteer.
Vestig 'n standaard PCR-laboratorium.
PCR-laboratorium word in beginsel in vier areas verdeel, naamlik reagensvoorbereidingsarea, monsterverwerkingsarea, amplifikasiearea en amplifikasieprodukontledingsarea.Die eerste twee areas is voorversterkingsareas, en die laaste twee areas is naversterkingsareas.Die voorversterkingsone en die naversterkingsone moet streng geskei word.Eksperimentele materiale, reagense, optekenpapier, penne, skoonmaakmateriaal, ens., kan slegs van die voorversterkingsarea na die naversterkingsarea vloei, dit wil sê vanaf reagensvoorbereidingsarea → monsterverwerkingsarea → amplifikasiearea → amplifikasieproduk-ontledingsarea, en moet nie terugvloei nie.Die lugvloei in die laboratorium moet ook van die voorversterkingsarea na die naversterkingsarea vloei, en nie terugvloei nie.Die ideale PCR-laboratoriumontwerp word hieronder getoon:
Figuur A: Ideale PCR-laboratoriumopstellingsmodus met negatiewe druk in die bufferkamer
Figuur B: Ideale PCR-laboratoriumopstellingsmodus met positiewe druk in die bufferkamer
Die PCR-laboratoriumopstellingsdiagramme wat in Figuur A en Figuur B gegee word, behoort 'n meer ideale opstellingmodus te wees, en die laboratorium met toestande kan na hierdie modus verwys vir ontwerp.Vir gewone laboratoriums word dit aanbeveel dat die PCR-amplifikasie-area en die produk-ontledingsarea geskei kan word, en die opening van die deksel moet soveel as moontlik in die monstervoorbereidingsarea en die PCR-amplifikasiearea verminder word.Onthou: Produkte en eksperimentele voorrade in die produkontledingsarea word streng verbied om na die monstervoorbereidingsarea en PCR-amplifikasiearea geneem te word.
Indien die laboratorium slegs PCR-opsporing en -identifikasie uitvoer, word dit aanbeveel om fluoresserende kwantitatiewe PCR in plaas van konvensionele PCR te gebruik.
Fluoresensie kwantitatiewe PCR opsporing resultate kan versamel en geanaliseer word deur fluoressensie seine, so dit is nie nodig om die deksel oop te maak vir elektroforese na die reaksie nie, wat die PCR produk kontaminasie vermy wat veroorsaak word deur die lekkasie van reaksie produkte om aërosols te vorm.As jy die aantal dopopeninge tydens die laaistap van gelelektroforese verhoog, sal aërosolbesmetting waarskynlik plaasvind.Dit word aanbeveel om die toepassing van kwantitatiewe PCR te bevorder en kwalitatiewe PCR geleidelik te vervang.
Die UNG anti-PCR produk kontaminasie stelsel word gebruik vir die PCR reaksie.
Die stelsel gebruik dUTP in plaas van dTTP.Na die PCR-reaksie word alle PCR-produkte (DNA-fragmente) by dUTP geïnkorporeer;in die volgende rondte van PCR-reaksie, word die UNG-ensiem wat by die sisteem gevoeg word by 37°C vir 5 minute voor PCR geïnkubeer, wat spesifiek alle DNA-fragmente wat dUTP bevat kan afbreek, en dan PCR-reaksie kan uitvoer.Dit kan die aërosolbesoedeling wat deur PCR-produkte veroorsaak word, heeltemal verwyder.Die effek word in die onderstaande figuur getoon:
Let wel: Vir die direkte PCR-reeks kan u die reeksprodukte van die anti-PCR-produkkontaminasiestelsel van Foregene kiesStel voor
Vir laboratoriums wat grootskaalse genotiperingstoetse uitvoer, word dit sterk aanbeveel om die UNG anti-PCR produk kontaminasiestelsel te gebruik vir die toets van reagense bykomend tot die konstruksie van redelike laboratoriums.
Onthou: Die gebruik van hierdie stelsel kan nie die PCR-produkbesoedeling wat reeds veroorsaak is, verwyder nie.Daarom moet die UNG-stelsel aan die begin van die betrokke toets gebruik word, en die UNG-stelsel moet gebruik word vir PCR-amplifikasie, om sodoende die kontaminasie van PCR-produkte Vals positief te voorkom.
Dit word aanbeveel om die Direct PCR-UNG-stelsel van Foregene te gebruik wanneer grootskaalse toetse uitgevoer word, soos:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Saad Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Muisstert Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Hierdie reeks kits van Foregenekan nie net PCR-opsporing vinnig en op groot skaal uitvoer nie, maar ook PCR-produkkontaminasie effektief voorkom en beheer.
Postyd: 19-Mrt-2021
