Hoeveel weet jy

Oor Nukleïensuur ekstraksie

Die begin en einde van gesuiwerde nukleïensuur

Alles is moeilik aan die begin, gesuiwerde nukleïensuur is die meeste

Aanvang van molekulêre eksperimente, vir daaropvolgende eksperimente

Sukses of mislukking het 'n deurslaggewende impak.

Spoor/ultraspoor UV-spektrofotometer word deur baie wetenskaplike navorsers bevoordeel omdat dit nukleïensuurkonsentrasie en proteïen- en soutioonreste eenvoudig, vinnig en ekonomies kan opspoor.

Soos ons almal weet, beteken A260 nukleïensuur absorpsie OD waarde, A280 beteken proteïen konsentrasie absorpsie OD waarde, A230 beteken sout ioon konsentrasie absorpsie OD waarde, so A260 kan nukleïensuur konsentrasie omskakel, A260/280 beteken proteïen residu, A260/230 beteken sout ioon oorblyfsel, maar dit is net 'n reël wat deur navorsers ontdek is, gebaseer op 'n groot aantal resultate.konvensionele” om te glo dat dit die suiwerheid van DNA en RNA kan verduidelik'n sekere mate.Dit is nie die enigste standaard vir die identifikasie van nukleïensuuropbrengs en suiwerheid nie, dit word slegs as 'n verwysing gebruik, en dit is nie 'n "goue standaard" nie.

Die Thermo Fisher ND-2000-handleiding beklemtoon die betroubaarheid van die toetsresultate

Die rede is dat die resultate wat verkry word deur die gebruik van 'n mikro/ultramikro UV-spektrofotometer slegs die opbrengs en suiwerheid van nukleïensuur van die kant af weerspieël, en daar is baie beïnvloedende faktore (optiese pad, monstervolume, monsterkonsentrasie, pH-waarde, ander ione wat absorbansiemeting beïnvloed, ens.), die gemete OD-waarde is nie noodwendig akkuraat nie.Terselfdertyd, as gevolg van die gebrek aan spesifisiteit van die absorpsiewaardebepalingsmateriaal, het enkelstring-DNA, dubbelstring-DNA, RNA, dNTP's en sommige proteïene almal absorpsiepieke by 260nm golflengte, en die konsentrasie wat deur A260 alleen bepaal word, is nie noodwendig die werklike DNA of RNA nie.Konsentrasie, en die integriteit en agteruitgang daarvan kan nie beoordeel word nie.

So hoe om die kwaliteit van ons gesuiwerde nukleïensuur te beoordeel?Benewens die gebruik van 'n mikro/ultramikro UV-spektrofotometer vir opsporing, word metodes soos agarosegelelektroforese ook vereis om die suiwerheid en integriteit van die nukleïensuur visueel te vertoon, en om die konsentrasie tot 'n sekere mate aan te dui.Op hierdie manier is die nukleïensuuropbrengs en suiwerheid verkry uit die opsporingsresultate van verskeie metodes geloofwaardig.

Eksperimentele grafiek vergelyking

Genomiese DNA van H1299-selle is met behulp van maatskappy A se DNA-ekstraksiestelle onttrek, en beduidende onsuiwerheidsbesmetting is gesien, wat tot hoë OD-waardes gelei het

(OD-metingswaarde en ooreenstemmende elektroferogram)

Evaluasie-indeks

Is daar 'n "goue standaard" vir nukleïensuuropbrengs en kwaliteittoetsing?

Sover ons weet, is daar geen eenvoudige, vinnige en goedkoop metode nie.Of dit nou spektrofotometer, gelelektroforese of massaspektrometrie is, hulle weerspieël almal die konsentrasie en suiwerheid van nukleïensuur in die oplossing vanuit verskillende aspekte, en hulle moet beoordeel word deur na mekaar te verwys.

Die beste evalueringsindeks is altyddie opvolg eksperimentele toepassing.Dit beïnvloed nie die doeltreffendheid van omgekeerde transkripsie en PCR-amplifikasie nie.Die verkryging van betroubare amplifikasieprodukte en Ct-waardes, en die verkryging van 'n volledige volgorde deur volgordebepaling is suksesvolle nukleïensuurekstraksie.

Om op te som, die siening van verhouding-alleen-teorie moet uitgedaag word deur die siening van "die gebruik van goeie stroomaf eksperimentele resultate as goeie ekstraksieparameters"!

Aanbevole Foregene DNA RNA-ekstraksiestelle om hoë DNA/RNA-suiwerheid te kry:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/