PCR-masjien|Verstaan jy regtig?
Nobelpryswennende PCR-tegnologie
In 1993 het die Amerikaanse wetenskaplike Mulis die Nobelprys in Chemie ontvang, en sy prestasie was die uitvinding van PCR-tegnologie.Die magie van PCR-tegnologie is in die volgende kenmerke: Eerstens is die hoeveelheid DNA wat geamplifiseer moet word uiters klein, en teoreties kan een molekule vir amplifikasie gebruik word;tweedens is die amplifikasie-doeltreffendheid hoog, en die hoeveelheid van die teikengeen is eksponensieel.Versterking, meer as 10 miljoen keer in 'n paar uur.Nou is die PCR-instrument wyd gebruik in lewenswetenskaplike navorsing en baie ander aspekte.
Verskillende modelle en vervaardigers van termiese fietsryers kan verskillende werkverrigting en herhaalbaarheid toon.Hierdie verskille beïnvloed nie net PCR-doeltreffendheid nie, maar ook die akkuraatheid en konsekwentheid van data wat verkry word.Om PCR-masjienkenmerke te verstaan, kan ons help om die sukses van ons eksperimente te maksimeer.
Verhitting module
Die akkuraatheid van die temperatuur van die termiese siklus kan deurslaggewend wees vir die sukses of mislukking van PCR.Goed-tot-put temperatuur konsekwentheid op die verwarming blok is ook van kritieke belang om betroubare en reproduseerbare PCR resultate te verkry.
Een manier om termiese akkuraatheid te verseker, is om gereeld te toets met behulp van temperatuurverifikasiestelle en herkalibreer soos nodig deur 'n opgeleide professionele persoon.Temperatuurverifikasietoetse word tipies gebruik om:
Goed-tot-put akkuraatheid relatief tot ingestelde temperatuur in isotermiese modus
Goed-tot-put akkuraatheid relatief tot ingestelde temperatuur na temperatuuromskakeling
Hittedeksel Temperatuur Akkuraatheid
Primer uitgloei temperatuurbeheer
Gradiënttemperatuurbeheer is 'n funksie van die PCR-instrument wat die optimalisering van primer-gloeiing in PCR fasiliteer.Die doel van die gradiëntverstelling is om wisselende temperature tussen modules te bereik, en deur ≥2°C temperatuurstyging en -daling tussen elke kolom, kan verskillende temperature gelyktydig getoets word om die optimale primer-gloeitemperatuur te verkry.Teoreties bereik 'n ware gradiënt lineêre temperatuur tussen modules.
Konvensionele gradiënt termiese siklusryers gebruik egter tipies 'n enkele termiese blok en beheer temperatuur deur twee verwarmings- en verkoelingselemente wat aan albei kante geleë is, wat dikwels die volgende beperkings tot gevolg het:
Slegs twee temperature kan ingestel word: die hoë en lae temperature vir primer uitgloeiing word aan beide kante van die termiese module gestel, en presiese instelling van ander temperature kan nie tussen module bereik word nie
As gevolg van die hitte-uitruiling tussen die verskillende kolomme, is die temperatuur tussen verskillende streke op die module meer geneig om 'n sigmoïdale kurwe te volg eerder as 'n ware lineêre gradiënt.
Monster temperatuur
Die vermoë van die termiese siklus om die monstertemperatuur te beheer is baie belangrik vir die akkuraatheid van die PKR-resultate.Instrumentspesifieke parameters soos oprittempo's, houtye en algoritmes is krities vir die voorspelling van monstertemperatuur.
Die tempo van verhitting en verkoeling van die PCR-masjien beteken dat die temperatuur verander tussen PCR-stappe wat oor 'n sekere tydperk plaasvind.Aangesien dit 'n sekere hoeveelheid tyd neem vir die hitte om van die module na die monster oor te dra, sal die werklike verhitting en afkoeltempo van die monster stadiger wees.Daarom moet die definisie van temperatuurveranderingspoed onderskei en verstaan word.
Die maksimum of piek module-oprittempo verteenwoordig die vinnigste temperatuurverandering wat die module oor 'n baie klein tydperk tydens die oprit kan bereik.
Die gemiddelde blokoprittempo verteenwoordig die tempo van temperatuurverandering oor 'n langer tydperk en sal 'n meer verteenwoordigende maatstaf van PCR-masjienspoed verskaf.
Die maksimum monster verhitting en verkoeling tempo en die gemiddelde monster verhitting en verkoeling tempo weerspieël die werklike temperatuur verkry deur die monster.Die tempo van monsterverhitting en verkoeling sal 'n meer akkurate vergelyking van die werkverrigting van die PCR-masjien en die potensiële impak daarvan op PCR-resultate verskaf.
Wanneer 'n fietsryervervanging uitgevoer word, word dit aanbeveel om 'n instrument te gebruik met 'n oprittempoprogram wat die vorige modus simuleer vir makliker vervanging en minimale impak op PCR-herhaalbaarheid.
Die termiese fietsryer moet ontwerp word om stappe te tyd eers nadat die monster die vasgestelde temperatuur bereik het.Op hierdie manier sal die tyd wat die monster by die vasgestelde temperatuur gehandhaaf word meer akkuraat gehandhaaf word met die ooreenstemmende siklustoestande wat in die bedryfsprosedure vereis word.
Termiese fietsryers gebruik dikwels komplekse wiskundige algoritmes om te verseker dat monsters vinnig 'n vasgestelde temperatuur kan bereik volgens 'n voorafbepaalde program.Gebaseer op die volume van die reaksiestelsel en die dikte van die PCR-plastiek wat gebruik word, kan die algoritme die temperatuur van die monster voorspel en die tyd wat dit sal neem om die vasgestelde temperatuur te bereik.Deur op hierdie algoritmes staat te maak, sal die bloktemperatuur gewoonlik die vasgestelde waarde tydens die verhittings- of verkoelingsproses van die termiese siklusder oorskry deur 'n proses wat termiese blokoorskiet of -onderslag genoem word.So 'n opstelling verseker dat die monster die vasgestelde temperatuur so vinnig as moontlik bereik sonder om homself te oorskiet of te onderskiet.
Eksperimentele deurset
Faktore wat die deurset van 'n termiese fietsryer kan verhoog, sluit in oprittempo's, termiese blokkonfigurasies en integrasie van outomatiseringsplatforms.
Die verhitting- en verkoelingstempo van die termiese fietsryer verteenwoordig die spoed waarteen dit die vasgestelde temperatuur bereik.Hoe vinniger die temperatuur styg en daal, hoe vinniger sal die PCR loop, wat beteken dat meer eksperimente in 'n gegewe tydperk voltooi kan word.Daarbenewens kan eksperimente versnel word deur vinniger DNA-polimerases te gebruik.
Die ontwerp van die termiese siklusmodule is ook deurslaggewend vir PKR-eksperimente.Byvoorbeeld, vervangbare modules laat buigsaamheid toe in die aantal monsters per lopie.Daarbenewens is verwarmingsmodules met individueel beheerbare modules ideaal om verskillende PCR-programme gelyktydig op een termiese siklus te laat loop.
Vir outomatiese hoë-deurset PCR, moet die sagteware wat die pipet hantering stelsel beheer programmeerbaar en versoenbaar wees.Outomatiese stelsels is ideaal vir die uitvoering van hoë-deurset PCR-reaksies omdat hulle deurlopend uitgevoer kan word met min menslike ingryping, waardeur die tyd wat benodig word vir handmatige eksperimentele opstelling verminder word en die aantal reaksies in 'n gegewe tydperk verhoog word.
Betroubaarheid, duursaamheid en kwaliteitversekering van termiese fietsryers
Benewens werkverrigting en deurvloeivermoëns, behoort die PCR-masjien ook sekere herhaalde gebruik, omgewingstres en versendingstoestande te kan weerstaan.Sommige vervaardigers kan verslag doen oor hoe die instrument betroubaarheids- en duursaamheidstoetse uitvoer.Die ooreenstemmende PCR-instrumentopsporing sluit in:
Betroubaarheid: Meganiese uitrustings word gebruik om herhaalde toetse op instrumentkomponente wat gereeld gebruik word, soos termiese deksels, beheerpanele/raakskerms en temperatuurfietsmodules uit te voer.
Omgewingsdruk: Omgewingskamers kan gebruik word om verskillende toestande van roetine-eksperimente, soos temperatuur, humiditeit, te simuleer.
Versendingstoetsing: Intense skok- en vibrasietoetse kan volgens International Safety Shipping Association-standaarde uitgevoer word om te verseker dat die instrument in onbeskadigde bedryfstoestande kan arriveer.
Waarborg en diens vir die instandhouding van die PCR-masjien
Ten spyte van streng betroubaarheids- en duursaamheidstoetse, het termiese fietsryers onvermydelik tegniese probleme oor die leeftyd van die instrument.Vir gemoedsrus moet die vervaardiger se waarborg, diens en instandhouding oorweeg word wanneer 'n instrument gekoop word.
Die buigsaamheid van dienste soos ter plaatse/terugkeer-na-fabriek-instandhouding, afstandmoniteringdienste, en vervangingsinstrumente in die instandhoudingsproses, ens., om die impak op werkdoeltreffendheid te verminder.
Die lengte van die waarborgtydperk, die omkeertyd van die diens, die toeganklikheid van tegniese ondersteuning en die vaardighede van professionele ondersteuningspersoneel.
Uitvoerbaarheid van instrumentinstallasie, werking, samewerking en verifikasie om aan laboratorium- en verwante regulatoriese vereistes te voldoen.Onderhoudsdienste soos temperatuurverifikasie, toetsing en kalibrasie is beskikbaar om te verseker dat die instrument behoorlik werk met die ooreenstemmende parameters.
Verwante Produkte:
Postyd: 18 Oktober 2022
