Onlangs het ek iets wonderliks ​​ontdek!Baie gevorderde eksperiment professionele mense rondom hom ken nie eers sommige baie basiese eksperimentele kennispunte nie.

Kan jy byvoorbeeld die volgende vrae beantwoord?

Is daar 'n verskil tussen OD260 en A260?Wat beteken elkeen?
OD is die afkorting van optiese digtheid (optiese digtheid), A is die afkorting van absorpsie (absorpsie), die twee konsepte is eintlik dieselfde, "optiese digtheid" is "absorpsie", maar "optiese digtheid" is in lyn met die meeste nasionale standaarde en meer gestandaardiseer.

Gewoonlik meet ons die OD-waarde by 260nm om die nukleïensuurkonsentrasie te bereken, so wat verteenwoordig 1OD?
Nukleïensuur het 'n maksimum absorpsiepiek by 'n golflengte van 260nm, wat beide DNA en RNA bevat, sowel as gefragmenteerde nukleïensuurfragmente (dit is die sleutelpunt).
Die OD-waarde gemeet by 'n golflengte van 260 nm is aangeteken as OD260.As die monster suiwer is, kan die OD260-waarde die konsentrasie van die nukleïensuurmonster bereken.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (dubbelstring-DNS)
=37 μg/ml ssDNA (enkelstring-DNS)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTP'e (oligonukleotiede)
Is daar enige verband en verskil tussen RT-PCR, Realtime-PCR en QPCR?
RT-PCR is kort vir Reverse Transcription PCR
Real Time PCR=qPCR, kort vir Quantitative Real Time PCR
Alhoewel Real Time PCR (intydse fluoresserende kwantitatiewe PCR) en Reverse Transcription PCR (omgekeerde transkripsie PCR) blykbaar beide afgekort word as RT-PCR.Maar die internasionale konvensie is: RT-PCR verwys spesifiek na omgekeerde transkripsie PCR.

Wat is die algemeen gebruikte nt, bp en kb om die lengte van DNA/RNA in biologie te beskryf?
nt = nukleotied
bp = basispaar basispaar
kb = kilobasis

Natuurlik sou jy sê dat baie mense nie omgee vir hierdie klein besonderhede nie!Almal doen dit, en niemand sal jou vra wat dit is nie.Jy weet dit is onnodig, reg?

Nee, nee, nee, dit is baie nodig om dit te weet!as gevolg van watter?
Omdat jy 'n artikel wil plaas!Broer!Of jy nou mik na gradeplegtigheid of wetenskaplike navorsingsprestasies nastreef, jy moet staatmaak op artikels om te praat!

Nukleïensuurekstraksie behoort die eenvoudigste en mees basiese eksperiment te wees.Die kwaliteit van nukleïensuurekstraksie bepaal direk die resultate van daaropvolgende eksperimente.

Alhoewel ek dit al baie keer gesê het, is daar steeds baie vriende wat nie omgee nie.Hierdie keer het ek besluit om uit die artikel te beweeg!

Minimum inligting vir publikasie van kwantitatiewe intydse PCR-eksperimente, waarna verwys word as MIQE, is 'n stel fluoressensie kwantitatiewe eksperimentriglyne wat internasionaal bekendgestel is, wat minimum standaarde voorstel vir die eksperimentele inligting wat nodig is vir die evaluering van fluoressensie kwantitatiewe PCR-eksperimente en die publikasie van artikels.Deur die eksperimentele toestande en ontledingsmetodes wat deur die eksperimenteerder verskaf word, kan die beoordelaars die geldigheid van die navorser se eksperimentele skema beter evalueer.

Dit kan gesien word dat die volgende opsporingsitems in die afdeling van nukleïensuurekstraksie voorgestel is,

“E” dui inligting aan wat verskaf moet word en “D” dui inligting aan wat verskaf moet word indien nodig.

Die vorm is baie ingewikkeld, om die waarheid te sê, ek wil sê dat almal moet begin

suiwerheid (D), opbrengs (D), integriteit (E) en konsekwentheid (E) om Nukleïensure in hierdie vier aspekte te evalueer.

Volgens eksperimentele gewoontes, praat eers oor die evalueringsmetodes van suiwerheid en konsentrasie.

OD-meting is die gunsteling en maklikste opsporingsmetode vir eksperimenteerders.Wat die beginsel betref, gaan ek nie hier in besonderhede in nie.Baie laboratoriums gebruik nou ultra-mikrospektrofotometers om nukleïensuurmonsters direk kwantitatief te ontleed.Terwyl die absorpsiewaarde vertoon word, gee die program direk die konsentrasiewaarde (nukleïensuur, proteïen en fluoresserende kleurstof) en verwante verhoudings.Wat die ontleding van die OD-waarde betref, stoor hierdie prent en dit sal goed wees.

Universele OD waarde oplossing lys

Daar is egter 'n paar waarskuwings wat apart vir jou uitgebring moet word.

(Ek weet immers jy moet diegene wees wat spaar en wag totdat jy hulle nodig het!)

Nota 1 Toerusting

Die OD-waarde sal deur verskillende toerusting beïnvloed word.Solank die OD260 binne 'n sekere reeks is, is die waardes van OD230 en OD280 betekenisvol.Byvoorbeeld, die absorpsiereeks van die gewone Eppendorf D30 by 260nm is 0~3A, en die NanoDrop One van Thermo is by 260nm.Die absorbansie reeks van 0.5 ~ 62.5A.

Nota 2Verdunningsreagens

Die OD-waarde kan beïnvloed word deur die verdunning van verskillende reagense.Byvoorbeeld, die OD260/280 lesing van gesuiwerde RNA in pH7.5 10mM Trisbuffer is tussen 1.9-2.1, terwyl inneutrale waterige oplossingdie verhouding sal laer wees, miskien net 1,8-2,0, maar dit beteken nie dat die kwaliteit van RNA verander Verskil.

Nota 3Residuele stowwe

Die bestaan ​​van oorblywende stowwe sal die akkuraatheid van nukleïensuurkonsentrasiemeting beïnvloed, daarom is dit nodig om proteïen-, fenol-, polisakkaried- en polifenolresidu soveel as moontlik in nukleïensuurmonsters te vermy.

In werklikheid is ekstraksie met organiese reagense egter 'n ou metode.In kommersiële stelle kan die ekstraksie-effek verkry word deur 'n silika-gebaseerde adsorpsiekolom gekombineer met sentrifugering, die vermyding van giftige en skadelike organiese reagense wat moeilik is om te verwyder, ens. Die probleem, soos bv.Foregene se nukleïensuur-ekstraksiestel, gebruik nie DNase/RNase en giftige organiese reagense deur die hele operasie nie, vinnig en veilig, en dieeffek isgoed(het per ongeluk gesê dat dit bles is, maar ek weet jy wil weet).

Voorbeeld 1: Genomiese DNA ekstraksie opbrengs en suiwerheid

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) behandel grondmonsters van verskeie bronne, en die hoeveelheid en suiwerheid van genomiese DNA wat verkry word, word in die volgende tabel getoon:
Voorbeeld 2: Weefsel RNA ekstraksie opbrengs en suiwerheid

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) het verskeie weefselmonsters verwerk, en die hoeveelheid en suiwerheid van RNA wat verkry is, word in die tabel hieronder getoon (vir muisweefsel):
Moet egter nie dink dat jy klaar is met die OD-waarde nie.Het jy enige sorg vir die sleutelpunte wat ek vir jou aan die voorkant geteken het?

Kennisgewing

Gefragmenteerde nukleïensuurmolekules sal ook in die absorpsie bereken word.As jy aanvaar dat jy genomiese DNA-reste in die RNA het, sal jou OD-waarde baie hoog blyk te wees, maar die werklike konsentrasie van RNA kan nie bepaal word nie.Of jou RNA is Dit is nie duidelik of daar agteruitgang is nie, daarom het ons steeds 'n omvattende evalueringsmetode nodig om 'n meer akkurate oordeel te gee, dit wil sê die nukleïensuurintegriteitsevaluering wat in MIQE genoem word.