PCR-metodes en nukleïensuur-aërosolbesmetting in nukleïensuurtoetslaboratoriums is soos twee kante van 'n muntstuk.Ons kan net kies om dit te hê of nie, maar ons kan nie kies of ons dit wil hê of dit spandeer nie.

1. Sifting van DNA-verwyderaar

Om die ruimtelike verwydering van nukleïensuur-aërosolkontaminasie te bewerkstellig, is dit eers nodig om DNA-verwyderaars uit te sif wat nukleïensure in 'n vloeibare toestand kan verwyder.Want daar is nie baie DNA-verwyderaars wat regtig werk nie.Vir die eksperimentele metode, verwys asseblief na: DNA-verwyderaar kan nie 'n "geheime hoek" van die laboratorium wees nie!

In hierdie eksperiment is 100 kopieë/μL (CT ongeveer 31) van ASFV-plasmied en DNA-verwyderaar gekwantifiseer deur digitale PCR in gelyke volumes gemeng, en dan gereageer by kamertemperatuur vir 10min, 20min en 30min onderskeidelik.Na nukleïensuurekstraksie is qPCR-amplifikasie uitgevoer.'n Positiewe kontrole gemeng met plasmied en water is vergelyk.Aangesien die eksperiment nie op dieselfde tyd voltooi is nie, kan daar 'n sekere afwyking tussen die resultate wees, maar dit beïnvloed nie die afsluiting van die eksperiment nie.Tot dusver het ek 10 kommersiële DNA-verwyderaarprodukte geëvalueer.Slegs nr. 1, nr. 6 en nr. 8 produkte kan plasmied DNA effektief in vloeibare toestand afbreek.Ander produkte het amper geen effek nie.

Tabel 1 Nukleïensuurverwyderingseffek van kommersieel beskikbare DNA-verwyderaar

2. Die DNS-verwydering effek eksperiment van algemeen gebruikte ontsmettingsmiddels

1. Sifting van algemeen gebruikte ontsmettingsmiddels

Daar is baie soorte ontsmettingsmiddels wat algemeen in laboratoriums gebruik word: aldehiede, fenole, alkohole, kwaternêre ammoniumsoute, peroksiede, chloorpreparate en sure en basisse.Die ontsmettingseffekte van hierdie ontsmettingsmiddels op mikroörganismes is volledig deur eksperimente geverifieer, maar Daar is nie voldoende eksperimentele data oor die afbreek-effek van nukleïensure nie.Nukleïensuurtoetslaboratoriums benodig 'n ontsmettingsmiddel wat nie net 'n goeie ontsmettingseffek op mikroörganismes het nie, maar ook DNS kan afbreek.Die toetsresultate toon dat slegs twee chloorpreparate van 84 ontsmettingsmiddel en trichloorisosianuursuur en 1 M soutsuur aan die vereistes voldoen.Aangesien 1 M soutsuur hoogs bytend is, word dit aanbeveel dat chloorpreparate as afvalverwydering in nukleïensuurtoetslaboratoriums gebruik word.Chloorpreparate is egter korrosief vir metale en kan nie vir die ontsmetting van instrumente en toerusting gebruik word nie.

Tabel 2 DNS-verwyderingseffekte van verskillende tipes ontsmettingsmiddels

2. Die minimum effektiewe konsentrasie van chloorpreparate

Chloor-gebaseerde ontsmettingsmiddels het 'n sterk DNS-afbraak-effek, maar as gevolg van hul metaalkorrosiwiteit en irritasie kan dit gebruik word om die vloer, nie-metaal-toonbanke, weekpunte, sentrifugeerbuise en ander toetsitems skoon te maak.

Volgens die "New Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": Besoedelingstowwe (pasiënte se bloed, afskeidings en braaksel) beskikbare chloor 5g/L-10g/L chloorbevattende ontsmettingsmiddel;vloere, mure en voorwerpoppervlaktes gebruik beskikbare chloor 1g/L Chloor-ontsmettingsmiddel: klere, beddegoed en ander tekstiele word eers vir 30 minute in chloor-ontsmettingsmiddel met 0.5g/L beskikbare chloor geweek, en dan soos gewoonlik skoongemaak.

Tabel 3 DNA verwydering effek van verskillende konsentrasies van chloor ontsmettingsmiddel

Die toetsresultate toon dat: wanneer die effektiewe chloorkonsentrasie groter as of gelyk aan 1.2 g/L is, die chloorbevattende ontsmettingsmiddel 100 kopieë/μL plasmied heeltemal kan afbreek wanneer dit vir 5 minute gebruik word.Wanneer dit vir 10 minute ingewerk word, kan 84-ontsmettingsmiddel met 'n effektiewe chloorkonsentrasie groter as of gelyk aan 0.6 g/L 100 kopieë/μL plasmiede heeltemal afbreek.

3. Lugverwyderingseksperiment besoedel deur nukleïensuur-aerosol

Hoe om die lug wat deur nukleïensuur-aërosols besoedel is skoon te maak?Die meeste van die gedagtes is om 'n aërosol-besmette omgewing te skep en dit dan skoon te maak, of om nukleïensure skoon te maak na kontaminasie.Vir my is 'n eksperiment wat nie herhaal kan word nie en die resultate van die eksperiment nie kwantitatief ontleed kan word nie betekenisloos, daarom het ek 'n paar metodes van ontsmettingsmiddel-lugontsmetting geleen.Sien "GB27948-2020 Algemene vereistes vir lugontsmettingsmiddels" en "Tegniese spesifikasies vir ontsmetting"

1. Toets materiaal

1.1 DNS-verwyderaar: In hierdie eksperiment is twee kommersieel beskikbare DNS-verwyderaars 6 en 8 in Tabel 1 geselekteer.

1.2 Toetsplasmied: As in ag geneem word dat die CT-waarde van die meeste laboratoriumbesoedeling hoër as 30 sal wees, is die konsentrasie van ASFV-geenplasmied wat hierdie keer gebruik word ongeveer 100 kopieë/μL, en die fluoresserende kwantitatiewe PCR CT is ongeveer 31.07.Voeg die plasmied by die watte depper en lug droog.

1.3 Toetsinstrument: Die Bilingkehan KVBOX-ontsmettingsinstrument, wat vriendelik ondersteun word deur Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., het uitstekende lugontsmettingsprestasie met waterstofperoksied-ontsmettingsmiddel, en kan spore en ander mikroörganismes effektief doodmaak.

1.4 Toetsruimte: 'n geslote oordragvenster van ongeveer 0,1 kubieke meter.

2. Toetsmetode

Die hoeveelheid ontsmettingsmiddel wat op die ontsmettingsmasjien gestel word, is 10 ml, en die konsentrasie is 100 ml/m3, wat baie hoër is as "GB27948-2020 Algemene vereistes vir lugontsmettingsmiddels": wanneer aërosolsproei-ontsmetting gebruik word, moet die hoeveelheid ontsmettingsmiddel ≤10 ml/m3 wees