Wenke vir die verbetering van gomherwinning

1. Verhoog die monsterlading tydens elektroforese.

2. Gebruik vars voorbereide elektroforesebuffer.

3. Wanneer jy gom sny, probeer om net die gom met stroke te sny om die volume van gom sny te verminder: nie gom met min doelfragmente nodig nie, anders sal dit die hersteltempo beïnvloed.

4. Nadat jy twee of meer stukke gom gesmelt het, gebruik 'n buis, maak nie saak hoe groot die volume is nie en dra dit oor na dieselfde kolom.

5. Die oplossing wat in die sol gevoeg word, kan 'n bietjie meer wees, wat meer bevorderlik is vir die binding van DNA aan die membraan, maar oor die algemeen nie 750ul oorskry nie.

6. Die sleutel tot jelherwinning is om DNA aan die kolom te bind deur die soutkonsentrasie, suurheid (lading) en hidrofobisiteit van die oplossing in die kolom.As die pH van die elektroforesebuffer dus te hoog is, kan 10 ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) by die sol gevoeg word;om DNS-molekules op die membraan beter te onderskep, kan 30% isopropanol bygevoeg word om in die vloeistof te verhit nadat die gom opgelos is.

7. Voordat die eluent bygevoeg word, laat die kolom by kamertemperatuur vir 'n paar minute (ongeveer 10 minute) om die etanol heeltemal te verdamp.

8. Voeg laastens minder eluent by om die herwinningsvolume te minimaliseer.Oor die algemeen word 30-50μl eluent vir eluering gebruik (nie te min nie, anders sal dit nie die membraan kan benat nie, wat nie bevorderlik is vir eluering nie);die elueringsdruppels is in die middel van die membraan, om die DNA wat aan die membraan gebind is, volledig te elueer.

9. Nadat die eluent bygevoeg is, kan dit vir 5 minute in 'n waterbad van 55 grade geëlueer word of vir meer as 10 minute in 'n waterbad van 50 grade geplaas word, of oornag met 'n parafilm by 4 grade verseël word, en dan die volgende dag gesentrifugeer word vir herstel, die effek is goed.

10.Voeg die gesentrifugeerde eluaat terug by die adsorpsiekolom en sentrifugeer weer.

Gedetailleerde metodes en prosedures vir PCR-produkherwinning

1. Gewone rubberherwinning

As jy die gom wil herwin, is dit die beste om 'n kit te gebruik, wat gerieflik is en 'n effens hoër hersteltempo het.As jy dit regtig met die hand moet herstel, kan jy 3 keer die volume TE byvoeg nadat jy die gom gesny het.Nadat dit in 'n waterbad gesmelt is, word fenol, fenol/chloroform skoon onttrek, en etanol word neergeslaan.Dis dit.

2. DNA-herwinning vanaf lae-smeltpunt-gels

Suiwering van DNA Fragmente Voeg TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) gelyk aan die volume van die jel by en plaas in 'n 65°C waterbad vir 5 minute om die jel heeltemal op te los.

Nadat dit tot kamertemperatuur gebring is, is 'n gelyke hoeveelheid fenol (versadig met TE, TE in die boonste laag verseël, en die onderste laag fenol is verwyder) bygevoeg, en die mengsel is liggies gemeng (geen vermenging nodig nie), en gesentrifugeer teen 12 000 rpm vir 3 minute.Herhaal 1-2 keer.

Neem die supernatant, voeg 0.1 volume 3mol/L natriumasetaat (pH 5.2) en 2.5 keer volume absolute etanol by om etanolpresipitasie uit te voer.Los die gesuiwerde DNA op met 'n gepaste hoeveelheid TE, meet die inhoud en berei voor vir gebruik (dit kan gebruik word vir teikengeenstruktuuranalise, sondevoorbereiding, ens.).

3. PCR herstel met goeie amplifikasie spesifisiteit

As die spesifisiteit van PCR-amplifikasie goed is, is dit net 'n eenvoudige suiwering en herwinning van die PCR-produk.Jy kan 50 ug/ml proteïenase K by die PCR-produk voeg, 37 grade vir 1 uur, een keer met fenol/chloroform onttrek, een keer met chloroform onttrek en 0.1 volume van die supernatant byvoeg.Die natriumasetaat is herwin deur presipitasie met 2.5 volumes absolute etanol.

Verwante Produkte:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/