Gereelde vrae virDiere Totale RNA Isolasie kit

Die volgende ontleding van die probleme wat jy kan teëkom indierweefsel/sel RNA ekstraksie will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA word nie onttrek nie of RNA-opbrengste is laag

Daar is dikwels 'n verskeidenheid faktore wat hersteldoeltreffendheid beïnvloed, soos: weefselmonster RNA-inhoud, metode van werking, elueringsvolume, ens.

1. Ysbad of kryogeniese (4 °C) sentrifugering is tydens operasie uitgevoer.

Aanbeveling: Werk by kamertemperatuur (15-25 ° C) deur die hele proses, moenie ysbad nie en sentrifugeer by lae temperature.

2. Onbehoorlike monsterbewaring of oormatige monsterbergingstyd.

Aanbeveling: Berg monsters by -80 °C of vries in vloeibare stikstof en vermy herhaalde vries-ontdooi gebruik;probeer om vars weefsel of gekweekte selle vir RNA-ekstraksie te gebruik.

3. Onvoldoende monsterlisis.

Aanbeveling: Wanneer weefsel gehomogeniseer word, maak seker dat die weefsel voldoende gehomogeniseer is en dat die weefselselle voldoende verdeel is om die vrystelling van RNA te verduidelik.

4. Die eluent is nie korrek bygevoeg nie.

Aanbeveling: Bevestig dat RNase-vry ddH₂O word druppelsgewys by die middel van die suiweringskolommembraan gevoeg.

5. Die korrekte volume absolute etanol is nie by Buffer RL2 of Buffer RW2 gevoeg nie.

Aanbeveling: Volg die instruksies, voeg die korrekte volume absolute etanol by Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat die kit gebruik word.

6. Weefselmonster dosis is nie toepaslik nie.

Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 10⁶selle per 500 μl buffer RL1, aangesien oormatige weefselgebruik verminderde RNA-ekstraksie tot gevolg kan hê.

7. Onbehoorlike elutievolume of onvolledige eluering.

Aanbeveling: Die elueringsvolume van die suiweringskolom is 50-200 μl;indien die elueringseffek nie bevredigend is nie, word dit aanbeveel om die kamertemperatuur plasingstyd te verleng nadat voorverhitte RNase-vrye ddH bygevoeg is₂O, bv. vir 5-10 min.

8. Die suiweringskolom het etanolresidu na Buffer RW2-was.

Aanbeveling: As daar etanolresidu is na Buffer RW2-was, kan leë buis sentrifugering vir 1min, die tyd vir die leë buis sentrifugering operasie verhoog word na 2min, of die suiweringskolom kan by kamertemperatuur geplaas word vir 5 min om die oorblywende etanol voldoende te verwyder.

Gesuiwerde RNA word afgebreek

Die kwaliteit van die gesuiwerde RNA hou verband met faktore soos die bewaring van die monster, RNase-kontaminasie en manipulasie, ens.

1. Weefselmonsters word nie betyds gehou nie.

Aanbeveling: Indien weefselmonsters of selle nie betyds na versameling gebruik word nie, krioopreserveer onmiddellik by -80 °C of vloeibare stikstof.Om RNA te onttrek, gebruik 'n nuut geneem weefsel- of selmonster waar moontlik.

2. Herhaalde vries-ontdooiing van weefselmonsters.

Aanbeveling: Wanneer weefselmonsters gestoor word, is dit die beste om dit in klein stukkies te sny vir preservering, en een van die stukkies te verwyder wanneer dit gebruik word om herhaalde vries-ontdooiing van die monster en die afbreek van RNA te vermy.

3. RNase word ingebring of dra nie weggooibare handskoene, maskers, ens. tydens die operasie nie.

Aanbeveling: RNA-ekstraksie-eksperimente word die beste in aparte RNA-manipulasiekamers uitgevoer en die tabel word voor die eksperiment skoongemaak.

Dra weggooibare handskoene en maskers tydens die eksperiment om RNA-afbraak wat veroorsaak word deur die bekendstelling van RNase te verminder.

4. Reagense is gekontamineer met RNase tydens gebruik.

Aanbeveling: Vervang met 'n nuwe Animal Total RNA Isolation Kit vir verwante eksperimente.

5. Die sentrifugebuisies, punte, ens. wat in RNA-manipulasie gebruik word, is met RNase gekontamineer.

Aanbeveling: Bevestig dat die sentrifugeerbuise, -punte, pipette, ens. wat in RNA-ekstraksie gebruik word, almal RNase-vry is.

Gesuiwerde verkry RNA beïnvloed stroomaf eksperimente

RNA gesuiwer deur die suiwering kolom, as die soutione, proteïen-inhoud te groot is, sal die stroomaf eksperiment beïnvloed, soos: omgekeerde transkripsie, Northern Blot et al.

1. Die geëlueerde RNA het soutioonreste.

Aanbeveling: Bevestig dat die korrekte volume etanol by Buffer RW2 gevoeg is en voer 2 suiweringskolomspoelings uit teen die sentrifugale spoed aangedui vir werking;indien daar enige soutioonresidu is, laat die suiweringskolom na Buffer RW2 vir 5 min by kamertemperatuur en voer sentrifugering uit om die verwydering van soutkontaminasie te maksimeer.

2. Etanolresidu in geëlueerde RNA.

Aanbeveling: Bevestig dat na buffer RW2-was, die leë buis sentrifugering operasie uitvoer teen die sentrifugeerspoed wat aangedui is vir werking, die tyd van die leë buis sentrifugering operasie verhoog na 2 min as daar nog etanolresidu is, of laat dit by kamertemperatuur vir 5 min na die leë buis sentrifugering om die verwydering van etanolresidu te maksimeer.

Isolasie van nulkaensuurmonstertipes

Foregene se RNA-isolasiestelle kan totale RNA-isolasie/onttrekking verkry uit die volgende monsterbronne: Diereweefsel, plant, selle, viraal, bloed, ens.

Hoe bêre ek die kit

Stoor by kamertemperatuur vir 24 maande.