Diere-totaal-RNA-isolasiestel Totale-RNA-ekstraksie- en suiweringsstelle vir diereweefsels en -sel
Kit beskrywing:
Vinnig en doeltreffend onttrek hoë suiwer en hoë kwaliteit totale RNA uit verskeie diereweefsels.
U hoef nie bekommerd te wees oor RNA-afbraak nie.Die hele stelsel is RNase-vry
Verwyder DNA effektief met behulp van DNA-skoonmaakkolom
Verwyder DNA sonder om DNase by te voeg
Eenvoudig - alle bewerkings word by kamertemperatuur voltooi
Vinnig—operasie kan binne 30 minute voltooi word
Veilig—geen organiese reagens gebruik nie
Hoë suiwerheid—OD260/280≈1.8-2.1
Kitsbeskrywings
50 voorbereidings, 200 voorbereidings
Hierdie stel gebruik diedraai kolom en formuleontwikkel deur ons maatskappy, wat hoë-suiwerheid en hoë-gehalte totale RNA uit verskeie diereweefsels met hoë doeltreffendheid kan onttrek.Dit bied 'n doeltreffende DNS-skoonmaakkolom, wat genomiese DNS maklik van die supernatant en weefsellisaat kan skei en adsorbeer, eenvoudig en tydbesparend;RNA-alleen-kolom kan RNA doeltreffend bind en kan gelyktydig verwerk word met 'n unieke formule Baie monsters.
Die hele stelsel is RNase-vry, sodat die onttrekte RNA nie afgebreek word nie;Buffer RW1, Buffer RW2 buffer wasstelsel, sodat die verkry RNA vry is van proteïen, DNA, ioon, en organiese verbinding besoedeling.
Kit komponente
| Diere Totale RNA Isolasie Kit | ||
| Kit komponente | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RL2 | 15ml | 60ml |
| Buffer RW1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-vrye ddH2O | 10ml | 40ml |
| Slegs RNA-kolom | 50 | 200 |
| DNS-skoonmaakkolom | 50 | 200 |
| Handleiding | 1 stuk | 1 stuk |
Produk inligting
| Formaat | Draai kolom | Suiweringskomponent | Vorige kolom, reagens |
| Flux | 1-24 monsters | Tyd per voorbereiding | ~30 min (24 monsters) |
| Sentrifugeer | Lessenaar sentrifugeer | Pirolise skeiding | Sentrifugale skeiding |
| Voorbeeld | Diereweefsel;sel | Monster hoeveelheid | Weefsel:10-20 mg;Sel:(1-5)×106 |
| Elueringsvolume | 50-200 μL | Maksimum laai volume | 850 μL |
Kenmerke en voordele
■ Jy hoef nie bekommerd te wees oor RNA-afbraak nie;die hele stelsel is RNase-vry
■ Verwyder DNS effektief deur DNS-skoonmaakkolom te gebruik
■ Verwyder DNA sonder om DNase by te voeg
■ Eenvoudige-alle bewerkings word by kamertemperatuur voltooi
■ Vinnige werking kan binne 30 minute voltooi word
■ Veilig - geen organiese reagens benodig nie
■ Hoë suiwerheid -OD260/280≈1.8-2.1
Kit aansoek
Dit is geskik vir die ekstraksie en suiwering van totale RNA uit 'n verskeidenheid vars of bevrore diereweefsels of gekweekte selle.
Produk parameters
■ Stroomaf toepassings: eerste-string cDNA sintese, RT-PCR, molekulêre kloning, Northern Blot, ens.
■ Monsters: diereweefsel, gekweekte selle
■ Dosis: Weefsels 10-20mg, selle(2-5)×106
■ Maksimum DNA-bindingskapasiteit van suiweringskolom: 80 μg
■ Elueervolume: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit behandel 20mg
Vars muismonsters, neem 5% gesuiwerde totale RNA 1% agar
Glikogel elektroforese
1: Milt 2: Nier
3: Lewer 4: Hart
Berging en raklewe
Die stel kan vir 24 maande by kamertemperatuur (15–25 ℃) of 2–8 ℃ vir langer tyd gestoor word.Buffer RL1 kan vir 1 maand by 4 ℃ gestoor word nadat β-merkapto-etanol bygevoeg is (opsioneel).
Aangehaalde artikels
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-gelaaide lipiedagtige nanopartikels vir lewerbasisredigering via die optimalisering van sentrale saamgestelde ontwerp.Adv.Funksie.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontane apoptose van selle in terapeutiese stamselbereiding oefen immunomodulerende effekte uit deur vrystelling van fosfatidielserien.Sein Transduct Target Ther.2021 14 Jul;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA modifikasie verhoog onkogene mRNA translasie en bevorder intrahepatiese cholangiocarcinoom progressie.Mol Sel.2021 29 Jul:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-gemedieerde m6A-modifikasie fasiliteer lewerregenerasie deur endoplasmiese retikulum homeostase te handhaaf.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA isoaltion kits vir ander voorbeeldbronneis beskikbaar:
Sel, plant, viraal, bloed, ens.
RNA word nie onttrek nie of RNA-opbrengste is laag
Daar is dikwels 'n verskeidenheid faktore wat hersteldoeltreffendheid beïnvloed, soos: weefselmonster RNA-inhoud, metode van werking, elueringsvolume, ens.
1. Ysbad of kryogeniese (4 °C) sentrifugering is tydens operasie uitgevoer.
Aanbeveling: Werk by kamertemperatuur (15-25 ° C) deur die hele proses, moenie ysbad nie en sentrifugeer by lae temperature.
2. Onbehoorlike monsterbewaring of oormatige monsterbergingstyd.
Aanbeveling: Berg monsters by -80 °C of vries in vloeibare stikstof en vermy herhaalde vries-ontdooi gebruik;probeer om vars weefsel of gekweekte selle vir RNA-ekstraksie te gebruik.
3. Onvoldoende monsterlisis.
Aanbeveling: Wanneer weefsel gehomogeniseer word, maak seker dat die weefsel voldoende gehomogeniseer is en dat die weefselselle voldoende verdeel is om die vrystelling van RNA te verduidelik.
4. Die eluent is nie korrek bygevoeg nie.
Aanbeveling: Bevestig dat RNase-vry ddH2O word druppelsgewys by die middel van die suiweringskolommembraan gevoeg.
5. Die korrekte volume absolute etanol is nie by Buffer RL2 of Buffer RW2 gevoeg nie.
Aanbeveling: Volg die instruksies, voeg die korrekte volume absolute etanol by Buffer RL2 en Buffer RW2 en meng goed voordat die kit gebruik word.
6. Weefselmonster dosis is nie toepaslik nie.
Aanbeveling: Gebruik 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106selle per 500 μl buffer RL1, aangesien oormatige weefselgebruik verminderde RNA-ekstraksie tot gevolg kan hê.
7. Onbehoorlike elutievolume of onvolledige eluering.
Aanbeveling: Die elueringsvolume van die suiweringskolom is 50-200 μl;indien die elueringseffek nie bevredigend is nie, word dit aanbeveel om die kamertemperatuur plasingstyd te verleng nadat voorverhitte RNase-vrye ddH bygevoeg is2O, bv. vir 5-10 min.
8. Die suiweringskolom het etanolresidu na Buffer RW2-was.
Aanbeveling: As daar etanolresidu is na Buffer RW2-was, kan leë buis sentrifugering vir 1min, die tyd vir die leë buis sentrifugering operasie verhoog word na 2min, of die suiweringskolom kan by kamertemperatuur geplaas word vir 5 min om die oorblywende etanol voldoende te verwyder.
Gesuiwerde RNA word afgebreek
Die kwaliteit van die gesuiwerde RNA hou verband met faktore soos die bewaring van die monster, RNase-kontaminasie en manipulasie, ens.
1. Weefselmonsters word nie betyds gehou nie.
Aanbeveling: Indien weefselmonsters of selle nie betyds na versameling gebruik word nie, krioopreserveer onmiddellik by -80 °C of vloeibare stikstof.Om RNA te onttrek, gebruik 'n nuut geneem weefsel- of selmonster waar moontlik.
2. Herhaalde vries-ontdooiing van weefselmonsters.
Aanbeveling: Wanneer weefselmonsters gestoor word, is dit die beste om dit in klein stukkies te sny vir preservering, en een van die stukkies te verwyder wanneer dit gebruik word om herhaalde vries-ontdooiing van die monster en die afbreek van RNA te vermy.
3. RNase word ingebring of dra nie weggooibare handskoene, maskers, ens. tydens die operasie nie.
Aanbeveling: RNA-ekstraksie-eksperimente word die beste in aparte RNA-manipulasiekamers uitgevoer en die tabel word voor die eksperiment skoongemaak.
Dra weggooibare handskoene en maskers tydens die eksperiment om RNA-afbraak wat veroorsaak word deur die bekendstelling van RNase te verminder.
4. Reagense is gekontamineer met RNase tydens gebruik.
Aanbeveling: Vervang met 'n nuwe Animal Total RNA Isolation Kit vir verwante eksperimente.
5. Die sentrifugebuisies, punte, ens. wat in RNA-manipulasie gebruik word, is met RNase gekontamineer.
Aanbeveling: Bevestig dat die sentrifugeerbuise, -punte, pipette, ens. wat in RNA-ekstraksie gebruik word, almal RNase-vry is.
Gesuiwerde verkry RNA beïnvloed stroomaf eksperimente
RNA gesuiwer deur die suiwering kolom, as die soutione, proteïen-inhoud te groot is, sal die stroomaf eksperiment beïnvloed, soos: omgekeerde transkripsie, Northern Blot et al.
1. Die geëlueerde RNA het soutioonreste.
Aanbeveling: Bevestig dat die korrekte volume etanol by Buffer RW2 gevoeg is en voer 2 suiweringskolomspoelings uit teen die sentrifugale spoed aangedui vir werking;indien daar enige soutioonresidu is, laat die suiweringskolom na Buffer RW2 vir 5 min by kamertemperatuur en voer sentrifugering uit om die verwydering van soutkontaminasie te maksimeer.
2. Etanolresidu in geëlueerde RNA.
Aanbeveling: Bevestig dat na buffer RW2-was, die leë buis sentrifugering operasie uitvoer teen die sentrifugeerspoed wat aangedui is vir werking, die tyd van die leë buis sentrifugering operasie verhoog na 2 min as daar nog etanolresidu is, of laat dit by kamertemperatuur vir 5 min na die leë buis sentrifugering om die verwydering van etanolresidu te maksimeer.
