Die lae verhouding van A260/A230 word gewoonlik veroorsaak deur onsuiwerhede met die maksimum absorpsiegolflengte by 230nm.Kom ons kyk wat hierdie onsuiwerhede insluit:

• Algemene besoedelingstowwe	Absorpsie golflengte	Verhouding effek
  Proteïen	~230nm en 280nm	Gelyktydige vermindering van A260/A 280en A260/A 280verhoudings
  Guanidien sout	220-240 nm	Verminder die A260/A 280verhouding
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm en 270nm	Verminder die A260/A 280verhouding
  EDTA	~230nm	Verminder die A260/A 280verhouding
  Etanol	230-240 nm	Verminder die A260/A 280verhouding

 
 
 
Absorpsiegolflengte en kontraswaarde van algemene besoedelingstowwe

Proteïnbesmetting
Proteïenbesoedeling kan as die mees algemene besoedeling in die nukleïensuur-ekstraksieproses beskou word.Proteïen bestaan ​​tussen die boonste waterfase en die ondersteorganiesfase.Besoedeling sal die verhouding van A260/A280 en A260/A230 op dieselfde tyd verminder, en die verhouding van A260/A230 sal duideliker verander as die verhouding van A260/A280.
Tydens daaropvolgendeomgekeerde transkripsieor qPCR reaksies, proteïenreste kan ensiemfunksie inhibeer of inmeng.Die beste manier om proteïenbesmetting te vermy, is om die beginsel van "liewer minder as meer, baie keer 'n klein hoeveelheid" in gedagte te hou wanneer die supernatant geaspireer word.

2. Guanidinium besoedeling
hidrochloried (GuHCl) en guanidientiosianaat (GTC) het die effek van denaturerende proteïene, wat selmembrane vinnig kan vernietig tydens die nukleïensuurekstraksieproses, wat proteïendenaturering en -presipitasie veroorsaak.Die absorpsiegolflengte van GuHCl en GTC is tussen 220-240 nm, en dieoorblywende guanidiniumsout sal die verhouding van A260/A230 verminder.Alhoewel die oorblywende guanidiniumsout die verhouding sal verminder,die impak op stroomaf eksperimente is eintlik weglaatbaar.

3. Trizol besoedeling
Die hoofkomponent van Trizol is fenol.Die hooffunksie van fenol is om selle te lyseer en proteïene en nukleïensuurstowwe in selle vry te stel.Alhoewel fenol proteïene effektief kan denatureer, kan dit nie RNase-aktiwiteit heeltemal inhibeer nie.Daarom word 8-hidroksikinolien, guanidien-isotiosianaat, β-merkapto-etanol, ens. by TRIzol gevoeg om endogene en eksogene RNase te inhibeer.
Wanneer sellulêre RNA onttrek word, kan Trizol die selle vinnig liseer en die nuklease wat uit die selle vrygestel word inhibeer, en die oorblywende Trizol sal die verhouding van A260/A230 aansienlik verminder.
Verwerkingsmetode: Wanneer sentrifugeer word, moet daarop gelet word dat die fenol in Trizol maklik oplosbaar is in die waterfase onder die toestand van 4° en kamertemperatuur.

4. Etanolresidu
Etanol word in die finale proses gebruik om die DNS te presipiteer terwyl souione wat aan die DNS gebind kan word, oplos.Die absorpsiegolflengte van die hoogsteabsorpsie piek vanetanol is ook by 230-240 nm, watsal ook die verhouding van A260/A230 verminder.
Die metode om etanolresidu te vermy kan twee keer tydens die finale eluering herhaal word, deur diedampkapvir twee minute om die etanol heeltemal te laat verdamp voordat buffer bygevoeg word vir eluering.
Dit moet egter bekend wees dat die verhouding slegs 'n evalueringsindeks van RNA-kwaliteit is.Indien bogenoemde bedrywighede streng gereguleer word, sal die afwyking tussen die verhouding en die standaardreeks nie 'n groot impak op stroomaf-eksperimente hê nie.
Verwante Produkte:
Diere Total RNA Isolasie kit
Plant Total RNA Isolasie kit
Seltotaal-RNA-isolasiestel
Plant Total RNA Isolation kit Plus