Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direkte Sel Lysis Sel Gereed Eenstap qRT-PCR Kits
Beskrywings
Hierdie stel gebruik 'n unieke lysisbufferstelsel wat RNA vinnig uit gekweekte selmonsters kan vrystel vir RT-qPCR-reaksies, en sodoende die tydrowende en moeisame RNA-suiweringsproses uitskakel.Die RNA-sjabloon kan binne net 7 minute verkry word.Die 5×Direkte RT Meng en 2×Direkte qPCR Mix-SYBR-reagense wat deur die kit verskaf word, kan vinnig en effektief intydse kwantitatiewe PCR-resultate verkry.
5×Direkte RT Meng en 2×Direkte qPCR Mix-SYBR het sterk inhibeerder toleransie, en die lysaat van die monsters kan direk as die sjabloon vir RT-qPCR gebruik word.Hierdie stel bevat die unieke RNA hoë-affiniteit Foregene omgekeerde transkriptase, en Hot D-Taq DNA polimerase, dNTPs, MgCl2, reaksiebuffer, PCR-optimaliseerder en stabiliseerder.
Spesifikasies
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponente
| Deel I | Buffer CL |
| Forgene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Deel II | DNA uitveër |
| 5× Direct RT Meng | |
| 2× Direkte qPCR Meng-SYBR | |
| 50× ROX Verwysingskleurstof | |
| RNase-vrye ddH2O | |
| Instruksies | |
Kenmerke en voordele
■Eenvoudig en doeltreffend: met Cell Direct RT-tegnologie kan RNA-monsters in net 7 minute verkry word.
■ Die monsteraanvraag is klein, so laag as 10 selle kan getoets word.
■ Hoë deurset: dit kan RNA vinnig opspoor in selle wat in 384, 96, 24, 12, 6-put plate gekweek is.
■ DNA Eraser kan vrygestelde genome vinnig verwyder, wat die impak op daaropvolgende eksperimentele resultate aansienlik verminder.
■ Geoptimaliseerde RT- en qPCR-stelsel maak die twee-stap RT-PCR omgekeerde transkripsie meer doeltreffend en PCR meer spesifiek, en meer bestand teen RT-qPCR reaksie inhibeerders.
Kit aansoek
Omvang van toepassing: gekweekte selle.
- RNA vrygestel deur monsterlisis: slegs van toepassing op die RT-qPCR-sjabloon van hierdie kit.
- Die stel kan vir die volgende doeleindes gebruik word: geenuitdrukking-analise, verifikasie van siRNA-gemedieerde geenstilte-effek, dwelmsifting, ens.
Diagram
Berging en raklewe
Deel I van hierdie stel moet by 4℃ gestoor word;Deel II moet by -20℃ gestoor word.
Foregene Protease Plus II moet op 4 gestoor word℃, moenie vries by -20 ℃ nie.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR moet by -20 gestoor word℃in die donker;as dit gereeld gebruik word, kan dit ook by 4 gestoor word℃ vir korttermynberging (gebruik binne 10 dae).
Real Time PCR primer ontwerp beginsels
Forward Primer en Reverse Primer
Vir Real Time PCR is onderlaagontwerp baie belangrik.Primers hou verband met die spesifisiteit en doeltreffendheid van PCR-amplifikasie, en kan ontwerp word met verwysing na die volgende beginsels:
Onderlaaglengte: 18-30bp.
GC-inhoud: 40-60%.
Tm-waarde: Primer-ontwerpsagteware, soos Primer 5, kan die Tm-waarde van die onderlaag gee.Die Tm-waardes van die stroomop en stroomaf primers moet so na as moontlik wees.Die Tm-berekeningsformule kan ook gebruik word: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wanneer PCR uitgevoer word, word 'n temperatuur onder die primer Tm-waarde van 5 °C oor die algemeen gekies as die uitgloeitemperatuur (die ooreenstemmende toename in die uitgloeitemperatuur kan die spesifisiteit van die PCR-reaksie verhoog).
Primers en PCR-produkte:
Ontwerp primer PCR amplifikasie produk lengte is verkieslik 100-150bp.
Ontwerponderlaag in die sekondêre strukturele area van die sjabloon moet soveel as moontlik vermy word.
Vermy die vorming van 2 of meer komplementêre basisse tussen die 3'-punte van stroomop en stroomaf primers.
Primer 3′ terminale basis kan nie teenwoordig wees met 3 bykomende opeenvolgende G of C nie.
Die primers self kan nie komplementêre strukture hê nie, anders sal 'n haarnaaldstruktuur gevorm word wat PCR-amplifikasie beïnvloed.
ATCG moet so eweredig as moontlik in die primer-volgorde versprei word, en die 3′-terminale basis moet vermy word as T.
Bylaag 1: Cell Direct RT-qPCR Kit komponent aanvulling pak
1.Sel Lysis Oplossing
|
| |||
| Kit komponente (24-put lisis stelsel / put) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deelek | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Forgene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA uitveër | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Meng
|
| |
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Meng | 800 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direkte qPCR Meng-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX Verwysingskleurstof | 40 μl | 200 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksiehandleidings:
