Buccale depper/FTA-kaart-DNA-isolasiestel Genomiese DNA-ekstraksie- of suiweringstel van buccale deppers
Kit beskrywing:
Suiwer vinnig hoë-gehalte genomiese DNA uit bukkale depper/FTA-kaartmonsters.
◮Geen RNase-kontaminasie:Die DNA-Slegs-kolom wat deur die kit verskaf word, maak dit moontlik om die RNA uit die genomiese DNA te verwyder sonder om RNase tydens die eksperiment by te voeg, wat verhoed dat die laboratorium deur eksogene RNase besmet word.
◮Vinnige spoed:Foregene Protease het hoër aktiwiteit as soortgelyke proteases, en verteer weefselmonsters vinnig;die operasie is eenvoudig, en die genomiese DNA-ekstraksie-operasie kan binne 20-80 minute voltooi word.
◮Gerieflik:Die sentrifugering word by kamertemperatuur uitgevoer, en daar is geen behoefte aan 4°C lae-temperatuur sentrifugering of etanolpresipitasie van DNA nie.
◮Veiligheid:Geen organiese reagens ekstraksie word benodig nie.
◮Hoë kwaliteit:Die onttrekte genomiese DNA het groot fragmente, geen RNA, geen RNase en uiters lae iooninhoud, wat aan die vereistes van verskeie eksperimente kan voldoen.
◮Mikro-elutiestelsel:Dit kan die konsentrasie van genomiese DNA verhoog, wat gerieflik is vir stroomaf-opsporing of eksperiment.
Beskrywing
Hierdie kit bied 'n doeltreffende en vinnige metode om hoë-konsentrasie genomiese DNA van buccale deppers en FTA Card (bloedkolle) te verkry.Die gebruik van ons maatskappy'se unieke DNA-enigste silika membraan spinkolom en formule, gekombineer met Foregene Protease, hoë-konsentrasie, hoë-gehalte genomiese DNA kan in 80 minute onttrek word.Die spesiaal ontwerpte klein suiweringskolom bind genomiese DNA, en die DNA kan met 'n klein hoeveelheid (15μl) elutiestelsel om die konsentrasie van die verkryde genomiese DNA te verhoog, wat gerieflik is vir stroomaf-opsporing of eksperiment.Die stel kan een of meer monsters op 'n slag verwerk, en die suiweringsproses vereis nie ekstraksie van organiese stowwe soos fenol, chloroform en tydrowende isopropanol of etanol-presipitasie nie, en die operasie is eenvoudig en tydbesparend.
Spesifikasies
50 Voorbereidings
Kit komponente
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Lineêre akrilamied |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Voorgene Protease |
| Slegs DNA-kolom |
| Instruksies |
Kenmerke en voordele
-Geen RNase-kontaminasie: Die DNS-Slegs-kolom wat deur die kit verskaf word, maak dit moontlik om RNA uit genomiese DNA te verwyder sonder om RNase tydens die eksperiment by te voeg, om te verhoed dat die laboratorium deur eksogene RNase besmet word.
- Vinnige spoed: Foregene Protease het hoër aktiwiteit as soortgelyke proteases, verteer monsters vinnig;eenvoudige operasie.
- Gerieflik: Die sentrifugering word by kamertemperatuur uitgevoer, en daar is geen behoefte aan 4 ° C lae-temperatuur sentrifugering of etanol presipitasie van DNA nie.
-Veiligheid: Geen organiese reagens-ekstraksie word vereis nie.
-Hoë kwaliteit: Die onttrekte genomiese DNA het groot fragmente, geen RNA, geen RNase, en uiters lae iooninhoud, wat aan die vereistes van verskeie eksperimente kan voldoen.
-Mikro-elutiestelsel: Dit kan die konsentrasie van genomiese DNA verhoog, wat gerieflik is vir stroomaf-opsporing of eksperiment.
Kit aansoek
Dit is geskik vir die suiwering van genomiese DNA uit die volgende monsters: buccale deppers, FTA-kaart (bloedvlekke).
Berging en raklewe
-Hierdie kit kan vir 12 maande onder droë toestande by kamertemperatuur (15-25°C) gestoor word;as dit vir 'n langer tydperk gestoor moet word, kan dit by 2-8°C gestoor word.
Let wel: As dit by lae temperatuur gestoor word, is die oplossing geneig tot neerslag.Voor gebruik, maak seker dat die oplossing vir 'n tydperk in die kit by kamertemperatuur geplaas word.Indien nodig, voorverhit dit in 'n 37°C waterbad vir 10 minute om die neerslag op te los, en meng dit voor gebruik.
-Foregene Protease-oplossing het 'n unieke formule, wat aktief is wanneer dit vir 'n lang tyd (3 maande) by kamertemperatuur gestoor word;sy aktiwiteit en stabiliteit sal beter wees as dit by 4°C gestoor word, daarom word dit aanbeveel om dit by 4°C te stoor, onthou om dit nie by -20°C te hou nie.
Die suiweringskolom is verstop
In hierdie kit, in die genomiese DNA-ekstraksie-operasie, word die suiweringskolom direk op die monster ensiematiese lisismengsel geadsorbeer sonder sentrifugeringstap, en die suiweringskolom kan geblokkeer word as gevolg van onvolledige ensiemisering en hoë viskositeit van die monster.
Die volgende moontlike oorsake is soos volg:
1. Onvolledige ensiematiese vertering van weefselmonsters.
Aanbeveling: Die monsterverwerkingstyd van Foregene Protease kan toepaslik verleng word of die supernatant kan geneem word na sentrifugering by 12,000 rpm (~13,400 × g) vir 5 min.
2. Oormatige gebruik van weefselmonsters of groot weefsels.
Aanbeveling: Dit is die beste om nie 1 Buccale depper in die monster te oorskry nie;indien die monster te groot is, verhoog die dosis Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 dienooreenkomstig.
3. Die monster viskositeit is te hoog.
Aanbeveling: Monsters kan toepaslik verdun word met 10 mM Tris-HCl voor genomiese DNA ekstraksie.
4. Fragmente van die bloedkaart is gesuig.
Aanbeveling: Die verbygaande sentrifugering tyd van stap 6 van bloedvlek (FTA Kaart) genomiese ekstraksie kan toepaslik verleng word.
Lae opbrengs of geen DNA
Daar is dikwels 'n verskeidenheid faktore wat genomiese DNA-opbrengs beïnvloed, insluitend monsteroorsprong, monsterbergingstoestande, monstervoorbereiding, manipulasie, ens.
Genomiese DNA kan nie tydens ekstraksie verkry word nie
Die moontlike oorsake is soos volg:
1. Onbehoorlike bewaring van monsters of berging vir te lank lei tot genomiese DNA-afbraak.
Aanbeveling: Monddeppers moet verkieslik vars gemonster word, en dit is nie raadsaam om bewaarde deppers vir genomiese DNA-ekstraksie-operasies te gebruik nie;bloedvlekmonsters moet verseker dat die kwaliteit gekwalifiseer is en die bergingstyd moet nie te lank wees nie.
2. Te min weefselgebruik kan lei tot geen ekstraksie van die ooreenstemmende genomiese DNA nie.
Aanbeveling: Volg die mondelinge deppersteekproefinstruksies in die operasiegids, en vee soveel keer as moontlik af sodat genoeg selle aan die monddepper geheg kan word vir genomiese DNA-ekstraksie;vir die onttrekking van bloedvlekmonsters, kan die bloedvleksnyarea gepas vergroot word.
3. Foregene Protease word onbehoorlik bewaar, wat lei tot 'n afname in sy aktiwiteit of inaktivering.
Aanbeveling: Bevestig die bergingstoestande van die Foregene Protease of vervang dit met 'n nuwe Foregene Protease vir ensiematiese reaksie.
4. Onbehoorlike bewaring van die kit of bergingstyd is te lank, wat lei tot die mislukking van sommige komponente in die kit.
Aanbeveling: Koop 'n nuwe Buccale swab DNA-isolasiestel vir verwante prosedures.
5. Buffer WB voeg nie absolute etanol by nie.
Aanbeveling: Bevestig dat buffer WB die korrekte volume absolute etanol byvoeg.
6. Die eluent word nie korrek by die silikoonfilm gevoeg nie.
Aanbeveling: Voeg 65 °C voorafverwarmde eluentdruppels by die middel van die silikoonmembraan en laat staan by kamertemperatuur vir 5 min om die elueringsdoeltreffendheid te verhoog.
Lae-opbrengs genomiese DNA geïsoleer
Die volgende moontlike oorsake is soos volg:
1. Onbehoorlike bewaring van monsters of berging vir te lank lei tot genomiese DNA-afbraak.
Aanbeveling: Monddeppers word verkieslik vars gemonster, en bewaarde deppers moet nie vir genomiese DNA-ekstraksie gebruik word nie.
2. As die hoeveelheid weefselmonster te klein is, sal die onttrekte genomiese DNA-inhoud minder wees.
Aanbeveling: Volg die mondelinge depper-monsternemingsinstruksies in die bedryfsgids en vee soveel keer as moontlik af sodat genoeg selle aan die monddepper geheg kan word vir genomiese DNA-ekstraksie.
3. Foregene Protease word onbehoorlik bewaar, wat lei tot 'n afname in sy aktiwiteit of inaktivering.
Aanbeveling: Bevestig die bergingstoestande van die Foregene Protease of vervang dit met 'n nuwe Foregene Protease vir ensiematiese reaksie.
4. Eluent probleme.
Aanbeveling: Gebruik Buffer EB vir eluering;as jy ddH gebruik2O of ander eluente, bevestig dat die pH van die eluaat tussen 7.0-8.5 is.
5. Die eluaat word nie korrek druppelsgewys bygevoeg nie.
Aanbeveling: Voeg eluentdruppels by die middel van die silikoonmembraan en laat staan by kamertemperatuur vir 5 min om elueringsdoeltreffendheid te verhoog.
6. Die elueringsvloeistof versamel te min.
Aanbeveling: Gebruik eluent vir genomiese DNA elutie soos vereis in die instruksies, ten minste nie minder nie as 15 μl.
Lae suiwerheid van genomiese DNA geïsoleer
Lae genomiese DNA-suiwerheid kan lei tot mislukking of onbevredigende resultate van stroomaf eksperimente, soos: ensieme kan nie oopgesny word nie, PKR kan nie die geenfragment van belang kry nie, ens.
Die moontlike oorsake is soos volg:
1. Heteroproteïenbesoedeling, RNA-besoedeling.
Ontleding: Die suiweringskolom is nie met Buffer PW gewas nie;die Buffer PW wassuiweringskolom is nie met die korrekte sentrifugale spoed gewas nie.
Aanbeveling: Maak seker dat daar geen neerslag in die supernatant is voordat etanol bygevoeg word nie;maak seker dat u die suiweringskolom volgens die instruksies was, en hierdie stap kan nie weggelaat word nie.
2. Onreinheid ioonbesoedeling.
Ontleding: Buffer WB wassuiweringskolom is weggelaat of slegs een keer gewas, wat gelei het tot oorblywende ioniese kontaminasie.
Aanbeveling: Maak seker dat Buffer WB 2 keer gewas word soos aangedui om oorblywende ione soveel as moontlik te verwyder.
3. RNA ensiem kontaminasie.
Ontleding: Buitelandse RNases is by buffer gevoeg;Buffer PW was werking was verkeerd, wat gelei het tot RNase residue, wat stroomaf RNA eksperimentele bewerkings beïnvloed, soos in vitro transkripsie.
Aanbeveling: Foregene-reeks nukleïensuur-isolasiestelle kan RNA verwyder sonder bykomende byvoeging van RNase, dus hoef buccale Swab/FTA Card DNA Isolation Kit nie RNase by te voeg nie;maak seker dat u die instruksies vir Buffer PW-wassuiweringskolom volg, en hierdie stap kan nie weggelaat word nie.
4. Etanolresidu.
Ontleding: Buffer WB het nie leë buis sentrifugering uitgevoer nadat die suiweringskolom gewas is nie.
Aanbeveling: Voer die korrekte leë buis sentrifugering bewerking uit volgens die instruksies.
5. Ander onreinheid besoedeling.
Ontleding: Gestoorde monsters of spesiale monsters word nie voorbehandel nie.
Aanbeveling: Behandel die monster deeglik soos voorgeskryf.
