(96-put) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Beskrywings
Die(96-put) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Groen Iverskaf'n unieke lysisbufferstelselto stel RNA vinnig vryvan gekweekte selmonsters vir RT-qPCR reaksies, wat die tydrowende en moeisame uitskakelingRNA-suiweringsproses, en neem slegs 7 minute om die vereiste RNA-sjabloon te verkry.Die5× Direct RT Mengen2× Direkte qPCR Meng-SYBRverskaf in die boks kan vinnig eneffektief intydse kwantitatiewe verkryPCR resultate.
5× Direct RT Mix en 2× Direct qPCR Mix-SYBR het sterk inhibeerder toleransie, en kan die lysaat van die monster wat getoets moet word gebruik as 'n sjabloon vir doeltreffende omgekeerde transkripsie en spesifieke amplifikasie.Die reagens bevat Foregene unieke omgekeerde transkriptase met hoë affiniteit vir RNA, sowel as Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl2 , reaksiebuffer, PKR-optimaliseerder en stabiliseerder, en kan saam met die lisisbuffer gebruik word om die monster vinnig, maklik en akkuraat op te spoor, en dit het die kenmerke van hoë sensitiwiteit, sterk spesifisiteit en goeie stabiliteit.
Die kit is gemik op mikrosisteemlise van 96-put gekweekte selle, en het goeie eenvormigheid en konsekwentheid;die kit komponente verskaf 96 lisis reaksies, 96 omgekeerde transkripsie reaksies en 96×2 qPCR reaksies, wat kan voldoen aan die 96-put selle plaat vir eenmalige gebruik, vermy die besoedeling wat veroorsaak word deur herhaalde oopmaak, vries en ontdooi van reagense en die verswakking van reagens prestasie.
Kit komponente
| Kit samestelling ( 50 μL lysisisteem/20 μLRT reaksie sisteem /20μL qPCR reaksie sisteem) | DRT-03011 | Opmerking | |
| 96T | |||
| DeelI | BufferCL | 5 ml | SelLysis |
| VoorgeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Deel II | DNAUitveër | 100 μL | |
| 5× Direct RT Meng | 400 μL | RT | |
| 2× Direkte qPCR Meng-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Verwysingskleurstof | 400µL | ||
| RNase- VryddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mjaarliks | 1 stuk | 1 porsie | |
*: Die lysis reagens DNA Eraser is ingesluit in Deel II van die stel;Sel Lysis, RT, en qPCR komponente kan afsonderlik gekoop word.
Kenmerke en voordele
■Eenvoudig en doeltreffend: met Cell Direct RT-tegnologie kan RNA-monsters in net 7 minute verkry word.
■ Die monsteraanvraag is klein, so laag as 10 selle kan getoets word.
■ Hoë deurset: dit kan RNA vinnig opspoor in selle wat in 384, 96, 24, 12, 6-put plate gekweek is.
■ DNA Eraser kan vrygestelde genome vinnig verwyder, wat die impak op daaropvolgende eksperimentele resultate aansienlik verminder.
■ Geoptimaliseerde RT- en qPCR-stelsel maak die twee-stap RT-PCR omgekeerde transkripsie meer doeltreffend en PCR meer spesifiek, en meer bestand teen RT-qPCR reaksie inhibeerders.
Kit aansoek
Omvang van toepassing: gekweekte selle.
- RNA vrygestel deur monsterlisis: slegs van toepassing op die RT-qPCR-sjabloon van hierdie kit.
- Die stel kan vir die volgende doeleindes gebruik word: geenuitdrukking-analise, verifikasie van siRNA-gemedieerde geenstilte-effek, dwelmsifting, ens.
Berging en raklewe
Deel I van hierdie stel moet by 4 gestoor word℃;Deel II moet by -20℃ gestoor word.
Foregene Protease Plus II moet op 4 gestoor word℃, moenie vries by -20 ℃ nie.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman moet by -20 gestoor word℃in die donker;as dit gereeld gebruik word, kan dit ook by 4 gestoor word℃ vir korttermynberging (gebruik binne 10 dae).
Real Time PCR primer ontwerp beginsels
Forward Primer en Reverse Primer
Vir Real Time PCR is onderlaagontwerp baie belangrik.Primers hou verband met die spesifisiteit en doeltreffendheid van PCR-amplifikasie, en kan ontwerp word met verwysing na die volgende beginsels:
- Onderlaaglengte: 18-30bp.
- GC-inhoud: 40-60%.
- Tm-waarde: Primer-ontwerpsagteware, soos Primer 5, kan die Tm-waarde van die onderlaag gee.Die Tm-waardes van die stroomop en stroomaf primers moet so na as moontlik wees.Die Tm-berekeningsformule kan ook gebruik word: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wanneer PCR uitgevoer word, word 'n temperatuur onder die primer Tm-waarde van 5 °C oor die algemeen gekies as die uitgloeitemperatuur (die ooreenstemmende toename in die uitgloeitemperatuur kan die spesifisiteit van die PCR-reaksie verhoog).
- Primers en PCR-produkte:
- Ontwerp primer PCR amplifikasie produk lengte is verkieslik 100-150bp.
- Ontwerponderlaag in die sekondêre strukturele area van die sjabloon moet soveel as moontlik vermy word.
- Vermy die vorming van 2 of meer komplementêre basisse tussen die 3'-punte van stroomop en stroomaf primers.
- Primer 3′ terminale basis kan nie teenwoordig wees met 3 bykomende opeenvolgende G of C nie.
- Die primers self kan nie komplementêre strukture hê nie, anders sal 'n haarnaaldstruktuur gevorm word wat PCR-amplifikasie beïnvloed.
- ATCG moet so eweredig as moontlik in die primer-volgorde versprei word, en die 3′-terminale basis moet vermy word as T.
Bylaag1: Cell DirekteRT-qPCR Kit komponentt aanvulling pak
1. Sel Lysis Oplossing
| Sel Lysis Oplossing | |||
| Kit komponente (24-put lisis stelsel / put) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deelek | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Forgene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA uitveër | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Meng | |
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Meng | 800 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-mengsel | ||
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Verwysingskleurstof | 40 μl | 200 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksiehandleidings:
