Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lisis Cell Ready Eenstap qRT-PCR Kits sonde
Beskrywings
Hierdie produk gebruik 'n unieke lysisbufferstelsel om RNA vinnig uit gekweekte selmonsters vry te stel vir RT-qPCR-reaksies, wat die tydrowende en moeisame RNA-suiweringsproses uitskakel, en slegs 7 minute om die vereiste RNA-sjabloon te verkry, met die 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman wat deur die kit verskaf word, kan vinnig en doeltreffend intydse PCR-resultate verkry.
5× Direct RT Mix en 2× Direct qPCR Mix-Taqman het sterk inhibeerdertoleransie en kan doeltreffende omkering en spesifieke versterking uitvoer deur die lysaat van die monster te gebruik wat as sjabloon gemeet moet word.Die reagens bevat Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl2, Reaksiebuffer, PCR Optimizer en Stabiliseerder, wat saam met lysisbuffer gebruik kan word om monsters vinnig en maklik op te spoor, en het die kenmerke van hoë sensitiwiteit, spesifisiteit en stabiliteit.
Spesifikasies
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponente
| Vinnig MaklikTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit komponente 20μl qPCR-reaksiestelsel | DRT-01021 | DRT-01022 | Let wel | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Deel I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Sel Lysis |
| Forgene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Deel II | DNA uitveër | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direkte RT-mengsel * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Verwysingskleurstof | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Handleiding | 1 stuk | 1 stuk | ||
*:Sel Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman kan apart gekoop word
Kenmerke en voordele
■Eenvoudig en doeltreffend: met Cell Direct RT-tegnologie kan RNA-monsters in net 7 minute verkry word.
■ Die monsteraanvraag is klein, so laag as 10 selle kan getoets word.
■ Hoë deurset: dit kan RNA vinnig opspoor in selle wat in 384, 96, 24, 12, 6-put plate gekweek is.
■ DNA Eraser kan vrygestelde genome vinnig verwyder, wat die impak op daaropvolgende eksperimentele resultate aansienlik verminder.
■ Geoptimaliseerde RT- en qPCR-stelsel maak die twee-stap RT-PCR omgekeerde transkripsie meer doeltreffend en PCR meer spesifiek, en meer bestand teen RT-qPCR reaksie inhibeerders.
Kit aansoek
Omvang van toepassing: gekweekte selle.
- RNA vrygestel deur monsterlisis: slegs van toepassing op die RT-qPCR-sjabloon van hierdie kit.
- Die stel kan vir die volgende doeleindes gebruik word: geenuitdrukking-analise, verifikasie van siRNA-gemedieerde geenstilte-effek, dwelmsifting, ens.
Berging en raklewe
Deel I van hierdie stel moet by 4 gestoor word℃;Deel II moet by -20℃ gestoor word.
Foregene Protease Plus II moet op 4 gestoor word℃, moenie vries by -20 ℃ nie.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman moet by -20 gestoor word℃in die donker;as dit gereeld gebruik word, kan dit ook by 4 gestoor word℃ vir korttermynberging (gebruik binne 10 dae).
Real Time PCR primer ontwerp beginsels
Forward Primer en Reverse Primer
Vir Real Time PCR is onderlaagontwerp baie belangrik.Primers hou verband met die spesifisiteit en doeltreffendheid van PCR-amplifikasie, en kan ontwerp word met verwysing na die volgende beginsels:
- Onderlaaglengte: 18-30bp.
- GC-inhoud: 40-60%.
- Tm-waarde: Primer-ontwerpsagteware, soos Primer 5, kan die Tm-waarde van die onderlaag gee.Die Tm-waardes van die stroomop en stroomaf primers moet so na as moontlik wees.Die Tm-berekeningsformule kan ook gebruik word: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wanneer PCR uitgevoer word, word 'n temperatuur onder die primer Tm-waarde van 5 °C oor die algemeen gekies as die uitgloeitemperatuur (die ooreenstemmende toename in die uitgloeitemperatuur kan die spesifisiteit van die PCR-reaksie verhoog).
- Primers en PCR-produkte:
- Ontwerp primer PCR amplifikasie produk lengte is verkieslik 100-150bp.
- Ontwerponderlaag in die sekondêre strukturele area van die sjabloon moet soveel as moontlik vermy word.
- Vermy die vorming van 2 of meer komplementêre basisse tussen die 3'-punte van stroomop en stroomaf primers.
- Primer 3′ terminale basis kan nie teenwoordig wees met 3 bykomende opeenvolgende G of C nie.
- Die primers self kan nie komplementêre strukture hê nie, anders sal 'n haarnaaldstruktuur gevorm word wat PCR-amplifikasie beïnvloed.
- ATCG moet so eweredig as moontlik in die primer-volgorde versprei word, en die 3′-terminale basis moet vermy word as T.
Bylaag1: Cell DirekteRT-qPCR Kit komponentt aanvulling pak
1. Sel Lysis Oplossing
| Sel Lysis Oplossing | |||
| Kit komponente (24-put lisis stelsel / put) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deelek | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Forgene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA uitveër | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Meng | |
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Meng | 800 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-mengsel | ||
| Kit komponente (20 μl reaksiestelsel) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Verwysingskleurstof | 40 μl | 200 μl |
| RNase-vry ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksiehandleidings:
