Escherichia Coli O157: H7 Nukleïensuur Opsporing Kit (PCR Fluorescent Probe Metode/vriesdroog)
Kit beskrywing:
Kat.nr.FP103
Dit word gebruik vir vinnige opsporing en sifting van E. coli O157:H7 in voedsel-, voer-, watermonsters en omgewingsmonsters.
Beskrywings
Dit word gebruik virvinnige opsporing en sifting van E. coli O157:H7 in voedsel-, voer-, watermonsters en omgewingsmonsters.
[Toets beginsel]
Volgens die beginsel van fluoresserende PCR-tegnologie word spesifieke primers en Taqman-probes ontwerp vir die spesifieke geen van Escherichia coli O157: H7, en opgespoor deur 'n fluoresserende PCR-instrument, om sodoende die opsporing van Escherichia coli O157: H7 te realiseer. Kwalitatiewe opsporing van DNA.
Kit Inhoud
Let wel: ROX-kanaalsonde is nie ingesluit nie.
| Componente | Spesifikasie | Qeenheid |
| Buffer A | Buis | 1 |
| Buffer B | Buis | 1 |
| Positiewe beheer | Buis | 1 |
| Negatiewe beheer | Buis | 1 |
Verwagte gebruik
Dit word gebruik vir vinnige opsporing en sifting van E. coli O157:H7 in voedsel-, voer-, watermonsters en omgewingsmonsters.
Bergingsvoorwaardes en vervaldatum
Berg by -20℃ in die donker en vermy herhaalde vries en ontdooiing.
Die geldigheidstydperk is 12maande, en die produksiedatum word op die buiteverpakking aangedui.
Instrumente en verbruiksgoedere
Fluorescerende kwantitatiewe PCR-instrument, pipetpistool en bypassende punte, vortex shaker, mini sentrifuge.
Gebruik
1. Voorbeeldverwerking
1.1 Monstertipe: Hierdie stel is geskik vir voedsel-, voer-, watermonsters en ander monsters wat vermoedelik deur Escherichia coli O157:H7 besmet is.Vir diepverwerkte vleisprodukte, drankies en ander stowwe wat pigmente bevat, moet dit afgespoel word om te verhoed dat die fluoressensieseinversameling beïnvloed word.
1.2 Monsterverwerking: Verwys na "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" vir monstervoorbereiding, verrykingskultuur en isolasie van Escherichia coli O157: H7.
- Nukleïensuur ekstraksie
Neem 20 mL verrykingsoplossing in 'n 1,5 mL sentrifugeerbuis, voeg 200 μL mikrobiese lysaat by (bykomende stel word benodig), draai vir 30 sekondes, sentrifugeer kortliks en sit eenkant.
Opmerkings: Die onttrekking van nukleïensuur uit die lysaat behoort binne 10 minute afgehandel te wees, en kan nie vir 'n lang tyd gestoor word nie.
3. Nukleïensuurversterking
3.1 Skakel die fluoresserende kwantitatiewe PCR-instrument aan vir gebruik.
Buffer A en Buffer B uit die stel, smelt hulle deeglik en sentrifugeer kortliks.Voeg 18 μL Buffer A en 2 μL Buffer B by elke PCR-reaksiebuis.Voeg dan 5 mL elk van die negatiewe kontrole, onttrekte nukleïensuur en positiewe kontrole by PCR-reaksiebuise, bedek die buise en sentrifugeer kortliks.
3.3 Dra die PCR-reaksiebuis oor na 'n fluoresserende PCR-masjien en gebruik die volgende prosedures om amplifikasie-eksperimente uit te voer: kies 25 mL vir die reaksiestelsel, versamel fluoressensieseine by 60°C vir elke siklus, en kies FAM vir die opsporingskanaal.
| Stap | Program | Aantal siklusse |
| 1 | 37 ℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (versamel fluoressensie) |
Gidse vir probleemontleding
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Geen RNA kan onttrek word nie of die opbrengs van nukleïensuur is laag
Daar is gewoonlik baie faktore wat herwinningsdoeltreffendheid beïnvloed, soos: monster RNA-inhoud, metode van werking, elueringsvolume, ens.。
Ontleding van algemene oorsake:
1.Ysbad of lae-temperatuur (4 ° C) sentrifugering tydens werking.
Voorstel: kamertemperatuur (15-25 ° C) werking, nooit ysbad en lae temperatuur sentrifugeer nie.
2. Onbehoorlike monsterberging of monsterberging vir te lank.
Voorstel: Berg monsters by -80 ° C of vries in vloeibare stikstof, en vermy herhaalde vries-ontdooi gebruik;probeer om vars versamelde monsters vir RNA-ekstraksie te gebruik.
3.Onvoldoende monster lisis
Aanbeveling: Maak asseblief seker dat die monster en die werkoplossing (lineêre akrilamied) deeglik gemeng en vir 10 minute by kamertemperatuur (15-25 ° C) geïnkubeer is.
4.Die eluent is verkeerd bygevoeg
Aanbeveling: Maak seker dat RNase-vrye ddH2O by die middel van die membraan van die suiweringskolom gevoeg word
5. Onbehoorlike volume watervrye etanol in Buffer viRW2
Voorstel: Volg asseblief die instruksies, voeg die korrekte volume watervrye etanol by Buffer viRW2 en meng dit goed voordat die kit gebruik word.
6. Onbehoorlike monstergebruik.
Voorstel: 200 µl monster per 500 µl buffer virl.Oormatige monstervolume sal lei tot verminderde RNA-ekstraksietempo.
7. Onbehoorlike elueringsvolume of onvolledige eluering.
Voorstel: Die eluentvolume van die suiweringskolom is 30-50μl;indien die elueringseffek nie bevredigend is nie, word dit aanbeveel om voorafverhitte RNase-vrye ddH by te voeg2O en verleng die tyd plaas by kamertemperatuur, soos 5-10min
8.Suiweringkolom het etanolresidu nadat dit in Buffer viRW2 gespoel is.
Voorstel: Indien etanol nog oorbly na spoel in Buffer viRW2 en leë buis sentrifugering vir 2min, kan die suiweringskolom by kamertemperatuur gelaat word vir 5min na leë buis sentrifugering om oorblywende etanol ten volle te verwyder.
Die afbreek van gesuiwerde RNA-molekules
Die kwaliteit van die gesuiwerde RNA hou verband met faktore soos monsterberging, RNase-kontaminasie en werking.
Ontleding van algemene oorsake:
1. Die versamelde monsters is nie betyds gestoor nie.
Voorstel: As die monster nie betyds na versameling gebruik word nie, stoor dit asseblief by -80 ℃ of vloeibare stikstof onmiddellik.Vir die onttrekking van RNA-molekules, probeer om waar moontlik vars versamelde monsters te gebruik.
2. Versamelde monsters was herhaaldelik gevries en ontdooi.
Voorstel: Vermy herhaalde vries en ontdooiing (nie meer as een keer nie) tydens monsterinsameling en berging, anders sal die opbrengs van nukleïensuur afneem.
3.RNase is in die operasiekamer ingebring of geen weggooibare handskoene, maskers, ens. is gedra nie.
Voorstel: Die ekstraksie van RNA-molekules-eksperiment word die beste in 'n aparte RNA-operasiekamer uitgevoer, en die eksperimentele tafel word voor die eksperiment skoongemaak.Dra weggooibare handskoene en maskers tydens die eksperiment om RNA-afbraak wat veroorsaak word deur RNase bekendstelling te vermy.
4.Die reagens word tydens die gebruik deur RNase besmet.
Voorstel: Vervang met 'n nuwe virale RNA-isolasiestel vir verwante eksperimente.
5.Die RNase-kontaminasie van die sentrifugeerbuise, pipetpunte, ens. Voorstel: Maak seker dat die sentrifugeerbuise, pipetpunte en pipette almal RNase-vry is.
Die gesuiwerde RNA-molekules het stroomaf-eksperimente beïnvloed
Die RNA-molekules wat deur die suiweringskolom gesuiwer word, sal stroomaf-eksperimente beïnvloed as daar te veel soutione of proteïene is, soos: omgekeerde transkripsie, Northern Blot, ens.。
1.Daar is oorblywende souione in die geëlueerde RNA-molekules.
Aanbeveling: Maak seker dat die korrekte volume watervrye etanol by Buffer viRW2 gevoeg is, en was die suiweringskolom twee keer volgens die korrekte sentrifugeringspoed op die gebruiksinstruksies; As daar nog sousione oor is, kan jy Buffer viRW2 by die suiweringskolom voeg, en dit vir 5min by kamertemperatuur laat.Doen dan sentrifugering om sousione-kontaminasie tot die grootste mate te verwyder
2.Daar is oorblywende etanol in die geëlueerde RNA-molekules
Voorstel: sodra jy bevestig dat suiweringskolomme deur Buffer viRW2 gespoel is, voer leë-buis sentrifugering uit volgens die sentrifugale spoed op die gebruiksinstruksies.As daar nog etanol oor is, kan dit vir 5 minute by kamertemperatuur gelaat word na 'n leë buis sentrifugering om die oorblywende etanol tot die grootste mate te verwyder.
Instruksiehandleidings:
Virale RNA Isolasie Kit Instruksiehandleiding
