Vinnige nukleïensuurekstraksiestel van mikrobiese in voedsel
Kit beskrywing:
Kat.nr.TK101
Hierdie kit neem 'n unieke oplossingstelsel aan, wat eenvoudig en gerieflik is sonder ekstraksie en suiwering, en direk gebruik kan word vir die opsporing van nukleïensuuramplifikasie.
Beskrywings
Hierdie kit neem 'n unieke oplossingstelsel aan, wat eenvoudig en gerieflik is sonder ekstraksie en suiwering, en direk gebruik kan word vir die opsporing van nukleïensuuramplifikasie.
Kit Inhoud
| Naam | Komposisie | Spesifikasie |
| Nukleïensuurvrystellingsmiddel | Lysaat | 6 ml |
Verwagte gebruik
Dit word gebruik vir vinnige nukleïensuuronttrekking van mikrobiese uit voedsel.
Bergingsvoorwaardes en vervaldatum
Berg by kamertemperatuur, geldig vir 12 maande.
Instrumente en verbruiksgoedere
Waterbad of metaalbad, hoëspoed sentrifuge (gebruik vir monstervoorbehandeling), pipet en punte.
Gebruik
1.VoorbeeldPre-behandeling
Behandel die monster Verwys na GB4789 of ander industriestandaarde.
2.Nukleïensuur-ekstraksie
Neem 20 ul van die verrykingsoplossing in die lysaatbuis, draai vir 30 sekondes, sentrifugeer kortliks en hou eenkant.
Opmerkings: Die onttrekking van nukleïensuur uit die lysaat behoort binne 10 minute afgehandel te wees en kan nie vir 'n lang tyd gestoor word nie.
【Nkennisgewing】
1. Dit word aanbeveel om skoon werksklere en handskoene tydens die eksperiment te dra.Die punte wat gebruik word, moet vooraf gesteriliseer word, en alle afval wat in die eksperiment gegenereer word, moet betyds weggedoen word.
2. Volg asseblief die operasiestappe streng.
3. Gebruik asseblief die kit binne die geldigheidstydperk datum.
Gidse vir probleemontleding
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Geen RNA kan onttrek word nie of die opbrengs van nukleïensuur is laag
Daar is gewoonlik baie faktore wat herwinningsdoeltreffendheid beïnvloed, soos: monster RNA-inhoud, metode van werking, elueringsvolume, ens.。
Ontleding van algemene oorsake:
1.Ysbad of lae-temperatuur (4 ° C) sentrifugering tydens werking.
Voorstel: kamertemperatuur (15-25 ° C) werking, nooit ysbad en lae temperatuur sentrifugeer nie.
2. Onbehoorlike monsterberging of monsterberging vir te lank.
Voorstel: Berg monsters by -80 ° C of vries in vloeibare stikstof, en vermy herhaalde vries-ontdooi gebruik;probeer om vars versamelde monsters vir RNA-ekstraksie te gebruik.
3.Onvoldoende monster lisis
Aanbeveling: Maak asseblief seker dat die monster en die werkoplossing (lineêre akrilamied) deeglik gemeng en vir 10 minute by kamertemperatuur (15-25 ° C) geïnkubeer is.
4.Die eluent is verkeerd bygevoeg
Aanbeveling: Maak seker dat RNase-vrye ddH2O by die middel van die membraan van die suiweringskolom gevoeg word
5. Onbehoorlike volume watervrye etanol in Buffer viRW2
Voorstel: Volg asseblief die instruksies, voeg die korrekte volume watervrye etanol by Buffer viRW2 en meng dit goed voordat die kit gebruik word.
6. Onbehoorlike monstergebruik.
Voorstel: 200 µl monster per 500 µl buffer virl.Oormatige monstervolume sal lei tot verminderde RNA-ekstraksietempo.
7. Onbehoorlike elueringsvolume of onvolledige eluering.
Voorstel: Die eluentvolume van die suiweringskolom is 30-50μl;indien die elueringseffek nie bevredigend is nie, word dit aanbeveel om voorafverhitte RNase-vrye ddH by te voeg2O en verleng die tyd plaas by kamertemperatuur, soos 5-10min
8.Suiweringkolom het etanolresidu nadat dit in Buffer viRW2 gespoel is.
Voorstel: Indien etanol nog oorbly na spoel in Buffer viRW2 en leë buis sentrifugering vir 2min, kan die suiweringskolom by kamertemperatuur gelaat word vir 5min na leë buis sentrifugering om oorblywende etanol ten volle te verwyder.
Die afbreek van gesuiwerde RNA-molekules
Die kwaliteit van die gesuiwerde RNA hou verband met faktore soos monsterberging, RNase-kontaminasie en werking.
Ontleding van algemene oorsake:
1. Die versamelde monsters is nie betyds gestoor nie.
Voorstel: As die monster nie betyds na versameling gebruik word nie, stoor dit asseblief by -80 ℃ of vloeibare stikstof onmiddellik.Vir die onttrekking van RNA-molekules, probeer om waar moontlik vars versamelde monsters te gebruik.
2. Versamelde monsters was herhaaldelik gevries en ontdooi.
Voorstel: Vermy herhaalde vries en ontdooiing (nie meer as een keer nie) tydens monsterinsameling en berging, anders sal die opbrengs van nukleïensuur afneem.
3.RNase is in die operasiekamer ingebring of geen weggooibare handskoene, maskers, ens. is gedra nie.
Voorstel: Die ekstraksie van RNA-molekules-eksperiment word die beste in 'n aparte RNA-operasiekamer uitgevoer, en die eksperimentele tafel word voor die eksperiment skoongemaak.Dra weggooibare handskoene en maskers tydens die eksperiment om RNA-afbraak wat veroorsaak word deur RNase bekendstelling te vermy.
4.Die reagens word tydens die gebruik deur RNase besmet.
Voorstel: Vervang met 'n nuwe virale RNA-isolasiestel vir verwante eksperimente.
5.Die RNase-kontaminasie van die sentrifugeerbuise, pipetpunte, ens. Voorstel: Maak seker dat die sentrifugeerbuise, pipetpunte en pipette almal RNase-vry is.
Die gesuiwerde RNA-molekules het stroomaf-eksperimente beïnvloed
Die RNA-molekules wat deur die suiweringskolom gesuiwer word, sal stroomaf-eksperimente beïnvloed as daar te veel soutione of proteïene is, soos: omgekeerde transkripsie, Northern Blot, ens.。
1.Daar is oorblywende souione in die geëlueerde RNA-molekules.
Aanbeveling: Maak seker dat die korrekte volume watervrye etanol by Buffer viRW2 gevoeg is, en was die suiweringskolom twee keer volgens die korrekte sentrifugeringspoed op die gebruiksinstruksies; As daar nog sousione oor is, kan jy Buffer viRW2 by die suiweringskolom voeg, en dit vir 5min by kamertemperatuur laat.Doen dan sentrifugering om sousione-kontaminasie tot die grootste mate te verwyder
2.Daar is oorblywende etanol in die geëlueerde RNA-molekules
Voorstel: sodra jy bevestig dat suiweringskolomme deur Buffer viRW2 gespoel is, voer leë-buis sentrifugering uit volgens die sentrifugale spoed op die gebruiksinstruksies.As daar nog etanol oor is, kan dit vir 5 minute by kamertemperatuur gelaat word na 'n leë buis sentrifugering om die oorblywende etanol tot die grootste mate te verwyder.
Instruksiehandleidings:
Virale RNA Isolasie Kit Instruksiehandleiding
