Direkte RT-qPCR Kit II
Kit beskrywing:
◮Direkte RT-qPCR Kit, met behulp van Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA Polimerase ontwikkel deur Foregene, met unieke reaksie buffer, maak hierdie kit met sterk weerstand en verenigbaarheid, en dit kan reaksie direk toets deur Foregene Lysis stelsel as sjabloon te gebruik.Hierdie stel kan aansoek doen vir COVID-19-nukleïensuur-opsporingstel en ander patogeniese bakterieë-nukleïensuur-opsporingstel.
Beskrywing
Direct RT-qPCR Kit verskaf afsonderlik verpakte RT-qPCR buffer, hoë doeltreffende Foreasy HS Taq DNA Polimeraseen Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),maak dit gerieflik vir die skep van back-end kits en stelsel aanpassing, binne eenvoudige verifikasie.
Direkte RT-qPCR Kit, met behulp van Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA Polimerase ontwikkel deur Foregene, met unieke reaksie buffer, maak hierdie kit met sterk weerstand en verenigbaarheid, en dit kan reaksie direk toets deur Foregene Lysis stelsel as sjabloon te gebruik.Hierdie stel kan aansoek doen vir COVID-19-nukleïensuur-opsporingstel en ander patogeniese bakterieë-nukleïensuur-opsporingstel.
Hierdie stel kan direk die komponent van die IVD-produk wees, maklik en vinnig gebruik.Dit benodig net maklike verifikasie, sonder om weer te ontwikkel.
Spesifikasies
500T, 50,000T
Kit komponente
| Kit inhoud (20 μL reaksiestelsel) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Foreasy Revertranskriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× Direkte RT-qPCRBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instruksie | 1 | 1 |
Bedryfstappe
A: Berei sjabloon en reagens voor
1. Berei voorbereide RNA sjabloon (Dit word aanbeveel om Foregene Total RNA Isolation Kit reeks kit te gebruik om RNA sjabloon te onttrek en te suiwer) of monster kraak produk (Dit word aanbeveel om Foregene Lysis stelsel te gebruik), spesifieke primers (10 μM) en ander relevante verbruiksgoedere, instrument.
2. Plaas die 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O en 20× ROX Reference Dye (indien dit nodig is) in die boks met ys, maak dit natuurlik smelt, en gemeng liggies.
B: Berei voor van RT-qPCR-stelsel
Kry die helfte van die volume reaksiebuffer van reaksiestelsel (byvoorbeeld, as die volume van die stelsel 20 μL is, moet dit 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer kry). Virooreenstemmende hoeveelheid ensiem, ons stel dit voorM-MLV: 10-30 U/20 μL reaksiestelsel,TaqDNA-polimerase:1-2 U/20 μL reaksiestelseldit is ons voorstel, jy moet dit toets en aanpas), voeg RNA-sjabloon, spesifieke primers en probes by, en voeg RNase-vrye ddH by2O tot 20 μL.Die spesifieke voorbereiding van RT-qPCR-reaksiestelsel kan na die volgende tabel 1 verwys word.
Tabel 1: Berei voor van RT-qPCR-stelsel
| Komponent | Volume | Finale konsentrasie |
| 2× Direkte RT-qPCR-buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 U | |
| Voorwaartse onderlaag (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Sjabloon (RNA of lysaat) | X μL | |
| 20× ROX Verwysingskleurstof | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Totale volume | 20 μL |
Let wel: Forward Primer en Reverse Primer is spesifieke primers van teikengeen.Die stelsel van die qPCR kon volgens praktiese eksperimentele en PCR-modelle aangepas word.Ons beveel 400nM aan vir die finale konsentrasie van die meeste primers.Pas asseblief die volume van spesifieke primers en probes aan volgens die voorbereide konsentrasie en die aanbevole finale konsentrasie.
1*: Kies geskikte finale konsentrasie van ROX Reference Dye volgens verskillende kwantitatiewe PCR-instrumente.Die optimale ROX-verwysingskleurstofkonsentrasie van algemene kwantitatiewe PCR-instrumente word in die volgende tabel getoon:
| Kwantitatiewe PCR-instrumente | Finale konsentrasie van ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Stap Een,ens. | 1× (byvoorbeeld, voeg 1μl 20×ROX Reference Dye by in 20 μL reaksiestelsel) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P en Mx4000, ens. | 0.5× (byvoorbeeld, voeg 0.5μl 20×ROX Reference Dye by in 20 μL reaksiestelsel) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorf kwantitatiewe PCR instrument, ens. | Sonder ROX Reference Dye |
Berging en raklewe
Die stel moet by -20 ± 5 ℃ gestoor word.Dit moet onmiddellik in -20℃ termostatiese yskas gestoor word.Die geldigheidstydperk is 2 jaar indien dit in geskikte toestand gestoor word.
